双扩凝集反应().ppt

沉淀反应与凝集反应 可溶性抗原　 包括蛋白质、多糖、脂多糖、结合蛋白（糖蛋白、脂蛋白、核蛋白等）。作为大分子颗粒，在水溶液中溶解。它们与相应抗体特异性结合后形成抗原抗体复合物，在一定条件下出现可见的沉淀反应。可溶性抗原是抗原研究的主体，它们存在于一切生物的细胞膜内外或体液 颗粒性抗原 包括细菌、支原体、立克次氏体、衣原体、病毒、红细胞等，它们相对颗粒较大，与相应抗体特异性结合后可出现凝集反应（如红细胞凝集）。从分子水平看，可溶性抗原存在于颗粒性抗原的细胞膜上，是颗粒性抗原诱导机体产生免疫应答的分子基础。 原理 用半固体琼脂凝胶作为介质，可溶性抗原、抗体在其中能自由扩散。将可溶性抗原和抗体分别加入琼脂板上相对应的孔中，两者各自向四周扩散，如果抗原和抗体相对应，则在两者比例适当处形成白色沉淀线。 主要材料 器材：载玻片、EP管、微量加样器、枪头、打孔器、 注射器针头 试剂：生理盐水、琼脂粉、 抗原（正常小鼠IgG）、 抗体（兔抗小鼠IgG血清）  实验步骤 配制1%琼脂：用生理盐水配制，加热溶解 制板：趁热将3.5ml融化琼脂水平铺在玻片上，室温下冷却凝固 打孔：用打孔器按图示打孔 稀释抗体：取5支EP管，将抗体倍比稀释 加样：周围孔加入不同稀释度的抗体，中间孔加入抗原 琼脂板放入湿盒内，置4℃，24-48小时后观察结果。 应用 测定抗体的效价 用特异性抗体检测抗原 检查抗原和免疫血清的特异性、纯度或浓度，比较抗原之间的异同点 原理 颗粒性抗原(完整的病原微生物或红细胞等)与相应抗体特异性结合，在有电解质存在的条件下，形成肉眼可见的凝集团块。 基本类型 直接凝集反应、间接凝集反应、凝集抑制反应等。 主要材料 器材：酒精棉球、灭菌干棉球、微量加样器、 灭菌枪头、玻片、一次性采血针 试剂 抗A试剂（蓝色）、抗B试剂（黄色） 实验原理 ABO和Rh血型是与人类输血关系最为密切的两个血型系统。 当一个人的红细胞上存在一种D血型物质（抗原）时，则称为Rh阳性，用Rh（+）表示；当缺乏D抗原时即为Rh阴性，用Rh（-）表示。 Rh（-）的分布因种族不同而差异很大: 白种人中的比例较高，约百分之十五 中国人群中； 新疆维吾尔等少数民族: 5%； 蒙古族人接近1%； 汉族人所占的比例极少，0.3% 1．取洁净载玻片1块，并标记（如图） 2．将抗A、B分型试剂分别加1滴于 标记有A、B的玻片两侧。 3．用酒精棉消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。用另一载玻片一端取适量血液加入抗抗A分型试剂，并混匀；用另一端再取适量血液加入抗抗B分型试剂，并混匀。用干棉花止血。 4．观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。 ABO血型的检测 LOGO * LOGO 抗原（antigen, Ag）: 能够刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞，并能与之特异性结合的物质。 抗体(antibody, Ab)： B细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的可特异性结合抗原的一组糖蛋白。 　抗原-抗体反应的特点与影响因素 反应条件： 适当的温度 电解质 酸碱度 特点： 特异性 可逆性 可见性（合适的抗原抗体比例） 凝集反应(agglutination):颗粒性抗原与抗体的反应。 沉淀反应(precipitation):可溶性抗原与抗体的反应。 补体参与的反应 免疫标记技术（immunolabelling technique）:用示踪物质标记 抗原或抗体，进行抗原-抗体反应的检测。 抗原-抗体反应的基本检测方法 沉淀反应 ——双向免疫扩散试验 Ag 1 2 3 4 5 control 6 NS 100ul PBS 100ul PBS 100ul PBS 100ul PBS Ab 100ul Ab 100ul Ab 100ul Ab 100ul Ab 1 ? ? 1/8 1/16 结果判断 Ag完全相同 Ag完全不同 Ag部分相同 凝集反应 ——ABO血型鉴定 直接凝集实验（ABO血型鉴定） 人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上