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根据蛋白质的理化性质，试写出五种用于蛋白质分离和纯化的方法,并简述其原理。 盐析：中性盐破坏蛋白质水化膜使其聚集沉淀。用于粗提蛋白质。 有机溶剂沉淀：能与水混溶的有机溶剂可以破坏蛋白质水化膜引起蛋白质发生沉淀。常需低温粗提蛋白质。 透析：利用仅能透过化合物的半透膜，浓缩蛋白质或去除盐类小分子 分子筛层析：可将蛋白质按分子量大小不同进行分离。 电泳：蛋白质在一定PH溶液中可带电荷，由于蛋白质质量和电荷量不同，从而将蛋白质分离成泳动速率快慢不等的条带 2 在下面指出的pH条件下，下列蛋白质在电场中向哪个方向移动？人血清蛋白：pH5.5，pH3.5；血红蛋白：pH7.07，pH9.0；胸腺组蛋白：pH5.0，pH8.0，pH11.5；已知：人血清蛋白的pI=4.64 血红蛋白的pI=7.07 胸腺组蛋白的pI=10.8。 答?人血清蛋白的pI=4.64，在pH5.5的电场中带负电荷，向阳极移动；在pH3.5的电场中带正电荷，向负极移动。血红蛋白的pI=7.07，在pH7.07不带净电荷，在电场中不移动；在pH9.0时带负电荷，向阳极移动。胸腺组蛋白的pI=10.8，在pH5.0和?pH8.0时带正电荷，向阴极移动；在pH11.5时带负电荷，在电场中向阳极移动。 3 举例说明蛋白质的结构与功能关系。 总的来说，一级结构是空间结构与功能的基础，空间结构的改变直接影响到蛋白质的功能。 对同源蛋白如细胞色素C一级结构的比较证明：一级结构的关键部位不变，功能不变。若一级结构关键部位序列变化，即使一个氨基酸发生异常，蛋白质的功能也可能发生很大的变化，如镰刀状红细胞性贫血。 结构对功能的影响最终是通过空间结构的变化来实现的。1 蛋白质变性时，即使一级结构无变化，但是由于空间构象被破坏，所以蛋白质功能活性丧失。如核糖核酸酶中存在四对二硫键，在大量B-疏基乙醇和适量尿素作用下，二硫键全部被还原为疏基，空间结构改变，酶活力丧失，除去变性剂，空间结构即可恢复，此时酶活力接近天然状态2 空间或酶的变构效应也很好地说明空间结构与功能的相关性。 简述蛋白质的分子组成与分子结构 组成 元素组成相似 主要是碳 氢 氧 氮 硫 有的含少量磷或金属元素 个别含有碘 结构 蛋白质分子是由许多氨基酸通过肽键相连的生物大分子 有4个结构层次 一级结构：蛋白质分子中氨基酸的排列顺序，靠肽键维系，有的还有二硫键 从N-端到C-端具有方向性。一级结构是空间构象及功能的基础， 二级结构：蛋白质主链局部空间结构，靠氢键维系，可作为三级结构的“建筑块”或结构域组成单位。 三级结构：整条肽链中全部氨基酸残基的空间排布，靠疏水作用，离子键，氢键，范德华力，二硫键维系 四级结构：多亚基间排布及相互作用，靠疏水作用，离子键，氢键维系 引起蛋白质变性的因素有哪些? 变性的实质是什么? 物理：加热 高温 紫外线 超声波 剧烈震荡 化学： 强酸 强碱 重金属离子乙醇 生物碱 实质是其特定的空间构象被破坏，也即有序的空间结构变无序的空间结构，从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失。 什么是蛋白质的二级结构？它主要有哪几种？各有何结构特征？ 指蛋白质分子中某一段肽链的局部空间结构，也就是该段肽链主链骨架原子的相对空间位置，并不涉及氨基酸残基侧链的构象。 (-螺旋 （1）以肽键平面为单位,以α－碳原子为转折盘旋形成右手螺旋(2) 每3.6个氨基酸残基 绕成一个螺圈(3)主链原子构成螺旋的主体,侧链在其外部(4)肽键的CO和NH 都形成氢键 (-折叠 相邻肽键平面的夹角为1100 ，呈锯齿状排列；侧链Ｒ基团交错地分布在片层平面的两侧。 (-转角 常见于球状蛋白质分子表面第一个残基的C=O与第四个残基的N-H形成氢键 无规卷曲 主链骨架无规律盘绕的部分 简述RNA与DNA的主要不同点。 DNA基本组成单位 脱氧核糖核苷酸 RNA核糖核苷酸 DNA碱基 A G C T RNA碱基A G C U 核糖存在RNA中 脱氧核糖存在DNA中 脱氧核糖化学稳定性比核糖好 DNA是双链的，RNA是单链的 DNA在细胞内是稳定存在的，而RNA的含量却时刻在改变着。 DNA只有酸解离，RNA具有两性解离 细胞内有哪几类主要的RNA？其主要功能是什么？ mRNA，蛋白质合成的模板 tRNA负责氨基酸转运，rRNA主要用于核糖体的组成 一种DNA分子含40%的腺嘌呤核苷酸，另一种DNA分子含30%的胞嘧啶核苷酸，请问哪一种DNA的Tm值高？为什么？ Tm指加热变性时，溶液中DNA有50%发生变性时所需的温度。G+C含量多的DNA，其Tm较高；本题中一种DNA含有40%A，判断出其G+C的含量应为20%；另一种DNA含有30%C，推断出其C+G含量为60