第一章种子扩大培养.ppt

菌种扩大培养 定义：由保藏的菌种开始，经过逐级扩大培养，最后获得供生产车间发酵罐接种的的足够数量和优质质量的种子。 有较完全和丰富的营养物质，糖分少，需充足氮源和生长因子，无机氮源比例大； 各种营养物质的浓度不必太高； 供孢子用的种子培养基，可添加易被吸收利用的碳源和氮源； 应考虑与发酵培养基的主要成分相近。 种子培养基特点 pH 选择最适种子培养pH的原则是获得最大比生长速率和适当的菌量 培养最后一级种子的培养基的pH应接近于发酵培养基的pH，以便种子能尽快适应新的环境 种子质量的控制措施 菌种稳定性的检查 测定其生产能力，从中挑选高产菌株，并及时对退化菌种进行复壮 提供适宜的生长环境 种子无杂菌检查，保证纯种发酵。 种子液生化分析项目主要有：营养基质的消 耗速度、pH变化、溶氧变化、色泽和气味等 第二节 菌种扩大培养 种子制备原理与技术 优良种子应具备的条件 生长活力强，延迟期短； 生理状态稳定； 浓度及总量能满足发酵罐接种量的要求； 无杂菌污染，保证纯种发酵； 适应性强，生产能力稳定 种子罐级数的确定 种子扩大的级数：制备种子需逐级扩大培养的次数 级数愈少，愈利于简化工艺及控制，并可减少种子罐污染杂菌的机会，减少消毒及值班工作量，减少因种子罐生长异常而造成的发酵波动。 确定方法 菌种的性质(如菌种传代后的稳定性) 瓶中的孢子数，孢子发芽及菌丝繁殖速度 发酵罐中种子培养液的最低接种量 种子罐与发酵罐的容积比 生产规模 随工艺条件的改变作适当的调整 种子质量的判断方法 通常检测的培养液中参数 pH是否在种子要求的范围之内 糖、氨基氮、磷酸盐的含量 菌丝形态、菌丝浓度和培养液外观 有无杂菌污染 其他参数，如接种前酶活、种子罐的溶氧和尾气等 种子制备 步骤： 斜面培养基中活化； 扁瓶固体培养基或摇瓶培养基中扩大培 　养，完成实验室种子制备 一级种子罐，制备生产用种子；视情况 　确定扩大级数，完成生产车间种子制备； 种子转种至发酵罐 种子制备过程 实验室种子制备阶段：琼脂斜面至固体培养基扩大培养（如茄子瓶斜面培养等或液体摇瓶培养 生产车间种子制备阶段：种子罐扩大培养 实验室种子制备 无菌方式接保藏的菌种至斜面培养基上，成熟后挑选正常菌落至试管斜面和摇瓶。 菌种产孢子能力强及孢子发芽、生长繁殖迅速，可用固体培养基培养孢子 菌种产孢子能力不强或孢子发芽慢，可用摇瓶液体培养法 不产孢子的菌种，保藏基础上，在一定温度下活化即可 种子扩大培养阶段 液体培养法：液体试管、三角瓶摇床振荡或回旋式培养。 表面培养法：茄子瓶、克氏瓶或瓷盘培养。 固体培养法：三角瓶、蘑菇瓶、克氏瓶、培养皿等麸皮培养。 生产车间种子制备 实验室制备的孢子斜面或摇瓶种子移接到种子罐进行扩大培养 目的： 一、种子罐培养一获得足够的菌种数量， 二、种子罐的培养基接近发酵罐培养的醪液成分和培养条件，使菌体适应发酵环境 例：柠檬酸发酵 以蔗糖为原料 成分 斜面 种子罐 发酵 麦芽汁 麦汁 蔗糖 2.5-5% 20% NH4NO3 0.225% 0.11% K2HPO4 0.03% MgSO4.H2O 0.025% 0.025% KCl 0.015% 琼脂 2% 薯干粉 成分 斜面 种子罐 发酵 麦芽汁 麦汁 薯干粉 10% 22-28% (NH4)2SO4 0.5% 琼脂 2% 种子罐级数越少，越有利于简化工艺和控制，并减少由于多次转种而带来的染菌机