细胞生物学实验重点摘要.docVIP

细胞生物学实验重点摘要 实验一：显微镜的使用和细胞形态结构的观察 显微镜结构： 机械部分：镜筒、镜臂、旋转盘、载物台、标本推进器、调节器、镜柱、镜座。 照明部分：集光器、光圈、反光镜、光源。 光学部分：目镜、瞳距调节、物镜。 显微镜使用方法： 打开光源；下降镜台，物镜（10倍）对准透光孔 ；放玻片；旋转粗调节器使镜台充分上升，然后缓慢下降，直到看到物像；旋转细调节器使物像清晰；将要放大部分移到视野中央；调换高倍镜，稍微转动细调节器看清物像；实验结束时下降载物台，取下玻片，将镜头转离通光孔的位置；把光源调到最低，关电源。 生物绘图的方法： 合理布局，大小适中，整齐美观。选典型结构描绘，要求真实、准确(注意各部结构的比例关系)。 使用HB铅笔。以点线为主，结构边缘用光滑线条描绘，明亮层次和颜色深浅用点的疏密来表示。 绘好图后，从需要标注名称的结构上向右侧引出不交叉的直线，末端平行。用正体字标明，最后在图的下方写明图的名称。 部分细胞的形态和结构： 蛙血片：细胞椭圆形，深紫色细胞核。 人血片：无细胞核，中央内凹的圆形细胞。 牛脊髓涂片：红色不对称的星状神经细胞。 牛脊神经节切片：圆形，细胞外围有小的被囊细胞。 脂肪细胞：细胞为圆形或不规则形状，细胞质和细胞核被脂滴挤到细胞边缘，呈空泡状结构。 平滑肌细胞：红色的长梭形细胞呈交错重叠状排列，细胞核呈椭圆或梭形。 实验二：细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的显示 实验原理： 利用化学试剂与细胞内蛋白质产生有色的沉淀反应，可对蛋白质进行定性、定位。 酸性蛋白：所带的负电荷多，需带正离子（H+）多酸性染料与之反应。 碱性蛋白：所带的正电荷多，需带负离子（OH-）多碱性染料与之反应。 将细胞经三氯醋酸处理抽提掉核酸后，用不同PH的固绿染液分别染色，使细胞内的酸性和碱性蛋白质分别显示出来。 临时装片的制备方法：推片时盖玻片与载玻片夹角为30°-45°。 实验流程：制备临时装片；将涂片作好标记放在70％乙醇中固定5分钟，室温晾干；放入5％三氯醋酸中60℃水浴20分钟，抽提出核酸；清水冲洗多次（3分钟以上），以冲去残留的三氯醋酸；用滤纸吸干玻片上水分；一张片放入0.1％碱性固绿 (pH8.0～8.5) 中染色30分钟以上, 另一张片放入0.1％酸性固绿 (pH2.0～2.5)染色2-3分钟；清水冲洗，镜检。 实验三：红细胞膜的通透性及细胞计数 实验原理： 以红细胞是否发生溶血及溶血的快慢判定等渗溶液中溶质能否透过红细胞膜及透过速度的快慢。 膜对物质的通透性： 膜对物质分子的通透性取决于膜的结构属性及分子特性： 脂溶性越强的分子越容易穿膜：非极性物质脂溶性强，易穿膜，如O2,CO2,N2；H2O例外。 分子量越小越容易穿膜。 不带电荷的分子容易穿膜，带电荷的离子不能或很难穿膜：离子脂溶性弱，且带有水化膜，增大了它的有效体积。 实验步骤： 用Ringer’s液稀释兔血制成兔的红细胞悬液，观察它的特点为一种不透明的红色浑浊液体； 观察红细胞在低渗溶液（水）中发生的溶血现象，从而掌握溶血的终点：取1支试管加入3ml蒸馏水，再加入0.3ml红细胞悬液，颠倒2次混匀，可见溶液由不透明的红色悬液迅速变成红色澄清液； 取10支试管加以编号，依次加入下列不同溶质等渗溶液3ml，观察通透性。 实验结论： 溶液种类 是否溶血 蒸馏水 是 0.17M氯化钠 否 0.17M硝酸钠 否 0.12M硫酸钠 否 0.17M氯化铵 是 0.17M醋酸铵 是 0.12M草酸铵 是 0.32M葡萄糖 否 0.32M甘 油 是 0.32M乙 醇 是 0.32M丙 醇 是 细胞计数： 用Ringer’s液稀释蛙血，制成蛙血细胞悬液； 取干净的血球计数板，将盖片盖在计数槽（光洁透亮的区域）上，用吸管将制备好的蛙血细胞悬液吹匀，吸管头紧挨盖片边缘，滴1滴悬液于血球计数板的斜坡和盖片之间的缝隙中，使之自然渗入到计数槽内； 3、在低倍镜（10X）下调暗视野，调节光圈（与10X镜头对应），观察计数槽上的格纹，计数4个角上4大格内的细胞数，按小格依次计数，压线细胞遵循“数上不数下，数左不数右”原则； 按以下公式计算每毫升悬液中的细胞数： （四大格中的细胞总数/4）*10000 = （）个/ml 实验四：临时制片及细胞分裂 洋葱内表皮临时制片原理： TritonX-100，非离子去垢剂，能去除细胞内除细胞骨架蛋白以外的所有蛋白质。 M缓冲液，含有促进微丝肌动蛋白聚合的所需成分。 考马斯亮兰，一种非特异性的蛋白质染料，能使蛋白染色。 操作步骤：撕取洋葱鳞茎内表皮；6mM磷酸缓冲液3分钟；1%tritonX-100 37℃ 2-3