高效液相色谱法测定食品中山梨酸.docVIP

高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠样品前处理方法 探讨高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的样品前处理方法。方法 不同样品用不同前处理方法，用二极管阵列管检测品(HPLC-DAD）分析测定，外标法定量。结果 该前处理方法线性关系良好，相对标准偏差分别为山梨酸3.18%、苯甲酸2.74%、糖精钠2.15%，加标回收率均在90%~100%之间。结论 该方法稳定性好、准确可靠、简单快速，适用于食品添加剂的测定。 高效液相色谱法可以同时测定山梨酸、苯甲酸、糖精钠，方便简单快捷。各类食品的前处理方法方面虽然有了新规定，但是还不够便捷。因此对部分不同种类的食品前处理方法进行摸索，主要改善是在各类样品处理之前加入适量氢氧化钠，在碱性条件下提取钾盐或者钠盐更为简单，其方法准确可靠，简便快速，便于推广。并对南充市内3区的市场、超市中部分产品中防腐剂和糖精钠进行检测。 1 材料与方法 1.1仪器与试剂 1.1.1 仪器 戴安U-3000高效液相色谱仪，水浴锅，超声清洗器。 1.1.2 试剂 色谱纯甲醇；超纯水；分析纯正己烷；分析纯乙醚；分析纯乙酸铵；0.1mol/L氢氧化钠；10.6％亚铁氰化钾；22％乙酸锌；pH7.2磷酸盐缓冲溶液。1.0 mg/m1山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准溶液 (国家标准物质中心)。 1.1.3 色谱条件 色谱柱：Agela-Cl8柱(250 mm×4.6mm×5um)；柱温：30℃；紫外检测波长：230 nm；流动相：甲醇：0.02 mol/L乙酸铵(5:95)；流速：1.0mL/min；进样体积：10μL 。 1.2 前处理方法 汽水、果汁、风味饮料类液体样品取样10.0 g于50ml容量瓶中，加入20～30ml纯水后超声脱气10 min，用1+1氨水调pH=7，稀释至刻度，经0.45μm滤膜过滤后上机。[1，2] 配制酒、葡萄酒、果酒类称取10.00g样品，放入小烧杯中，水浴加热出去乙醇，用氨水（1+1）调pH约7，加水定容至50.0ml，经0.45μm滤膜过滤后上机。[1，2] 乳饮料、酱油、醋等基体复杂的液体样品和酱及酱制品类称取2.00～3.00 g样品于50ml容量瓶中，加入20～30ml纯水混匀，加入氢氧化钠1.0 ml、亚铁氰化钾和乙酸锌各2.0 ml，加水至刻度混匀，静置15 min后用滤纸过滤，滤液再经0.45μm滤膜过滤后上机。 氢化植物油、蚝油、虾油以及含油量较高的样品类称取1.00～2.00 g样品于100ml的分液漏斗中，加入24.0ml纯水，加入氢氧化钠1.0 ml，剧烈振摇2min，然后加入正己烷20ml，继续剧烈振摇2min，静置15 min后取下层清液经0.45μm滤膜过滤后上机。 含胶基的果冻样品类和凝胶、胶基糖果类称取粉碎的样品1.00～2.00 g加1ml乙醚分散均匀，然后加氢氧化钠1.0 ml，用水定容至25.0ml，剧烈振摇后于60~70℃水浴30min，冷却后上清液经0.45μm滤膜过滤后上机。 乳脂糖果类称取粉碎的样品1.00～2.00 g、调味糖浆类称取2.00～3.00 g样品，加氢氧化钠1.0 ml、亚铁氰化钾和乙酸锌各2.0 ml，用水定容至25.0ml，剧烈振摇后于60~70℃水浴30min，冷却后取上清液经0.45μm滤膜过滤后上机。 风味冰、冰棍类直接自然融化后称取10.00g样品于50 ml容量瓶中，定容至刻度后振摇提取4h， 静置15 min后过滤取滤液经0.45μm滤膜过滤后上机。 复合调味料类称取样品2.00～3.00 g于25ml容量瓶中，加10ml磷酸盐缓冲液振摇提取4h，再用磷酸盐缓冲液定容至刻度并混匀，静置15 min后过滤取滤液经0.45μm滤膜过滤后上机。[3] 2 结果与分析 2.1 样品前处理 氢氧化钠有沉淀蛋白质的作用。而且不管样品中含的是不是苯甲酸、山梨酸的钠盐都可以先加氢氧化钠将溶液碱化，作用是将山梨酸、苯甲酸转化为水溶性的钠盐和糖精钠一起容易用水提取的方法处理[4]。一般油脂含量较高的样品都可以先用水提取后再用正己烷除去油脂。蛋白质含量高的样品都需要加入亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白质[5]。二氧化碳和乙醇含量高的液体样品都可以先加热除去。最终的提取液都为碱性，一般可在定容前用0.1mol/L硫酸溶液调pH为7左右[6]。最后的处理液都必须过0.45μm的滤膜后上机，以免对仪器损害。 2.2 标准曲线 用1.0 mg/m1山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准储备液稀释成含量分别为0、0.010、0.020、0.050、0.100、0.200 mg/m1混合标准使用液。保留时间定性，峰面积定量。山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准曲线的线性良