补体结合实验.pptVIP

50%溶血试验（ 50% complement hemolysis, CH50）测定血清总补体活性 一、实验原理 补体最重要的活性是溶细胞作用。特异性抗体与红细胞结合可激活补体引起溶血，溶血程度与补体的活性相关。溶血反应对补体的剂量依赖呈一特殊的S形曲线，该曲线在30%~70%之间最陡，几乎呈直线，即此阶段对补体量的变化非常敏感，因此实验常以50%溶血作为判断终点来测定血清总补体活性，这一方法称为补体50%溶血实验（ CH50 ）。 二、试剂 1、绵羊红细胞（SRBC）：无菌采静脉血，除去纤维蛋白后，洗涤配成2%浓度应用。 2、溶血素：抗绵羊红细胞抗体，需提纯后灭活补体。用稀释缓冲液稀释至2单位。 3、稀释缓冲液： PH7.4巴比妥缓冲液 三、方法 1、待检标本的处理： 取试管一支加待测血清0.20ml，加入3.80ml pH7.4巴比妥缓冲液，使血清为1：20稀释。 2、取1列10支试管，从1~10编号，第1~9为测定管，第10管为对照管。按表进行加样。 3、50%溶血标准管 全溶管：2%SRBC 1ml+4ml蒸馏水混匀静置10min 50%溶血管：2ml全溶管液体+2ml pH7.4巴比妥缓冲液。 4、上述所有试管经2500rpm，离心5min后，与50%溶血管肉眼初步比较，取较接近的2管进行比色，确定最