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反义技术？--利用人工合成或生物合成的DNA或RNA及其修饰物, 与RNA互补，抑制与疾病发生相关基因表达的一种手段，具有特异性且操作简单，可用于治疗由于基因突变过度表达所致的肿瘤和遗传疾病。 如何应用反义技术（以反义RNA为例）：1） 确定作用靶位2） 制备反义药物 作用机制1）形成三螺旋结构阻止转录2）激活RNA酶H,特异性降解DNA-RNA杂交分子中的RNA3）封闭酶结合位点，干扰复制，转录，或翻译过程中所需的酶的结合 作用特点1）特异性强，只阻断靶基因的表达2）较安全，一般不改变基因结构，不整合，最终会被水解3）易操作4）可复合给药，同时作用与多靶点5）亲和力受mRNA的二，三级结构影响6）设计要求高7）用于临床治疗尚有一些问题需要解决 miRNA 和siRNA的区别 1 来源:是miRNA是内源性的，而siRNA是人工体外合成的，通过转染进入生物体内。 2 结构:miRNA是单链RNA，而siRNA是双链RNA。 3 加工:Dicer酶对miRNA是不对称加工，仅剪切pre-miRNA的一个侧臂，其他部分降解；而对siRNA是切下双链RNA的前体的两侧臂。 4 作用位置:miRNA主要作用于靶标基因3-UTR区，而siRNA可作用于mRNA的任何部位。 5 作用机制:miRNA抑制靶基因的翻译，也可以导致靶标基因降解，即在转录后和翻译水平起作用，而siRNA只能导致靶基因的降解，即为转录后调控。 6 作用时间:miRNA主要在发育过程中起作用，调节内源基因表达，而siRNA不参与生物生长，是RNAi的产物，原始作用是抑制转座子活性和病毒感染。相同点：1）长度及特征：约在22nt左右，5’端是磷酸基，3’端是羟基。2）合成的底物：mRNA和SiRNA都是由双链RNA或RNA前体 形成。3）Dicer酶：依赖Dicer酶的加工，是Dicer的产物。4）Argonaute：都需要Argonaute家族蛋白参与。5）RISC组分：二者都是RISC组分。6）作用方式：都可以阻遏靶标基因的翻译，也可导致mRNA降解。7）进化关系：可能的两种推论，SiRNA是miRNA的补充，miRNA在进化过程中替代siRNA。 原核转座子类型1）插入序列：IS分子较小，两端具有短的反向重复序列，中间部仅有转座酶的基因，而没有抗性和其他基因。2）类插入序列：是指IS10R，IS50R和IS903，它们的结构和IS相似，但不独立存在，而是作为复合转座子两臂的组件。3）复合转座子：复合转座子要逼IS长，它指含有两侧的插入序列，内部具有一个或多个基因的可转座的DNA片段，即一类带有某些抗药性基因或其他宿主基因的转座子。一旦形成复合转座子，IS序列就不能再单独移动，只能作为复合体移动。4）TnA家族：两端具有IR，中部的编码区不仅编码抗性标记，还编码转座酶和解离酶。转座机制1）复制型转座：转座子以复制生成的一份拷贝进行转座的方式。转座因子在转座期间先复制一份拷贝，而后拷贝转座到新的位置，在原先的位置上仍保留原来的转座因子。复制转座有转移酶和解离酶的参与。转移酶作用于原来转座子的末端，解离酶则作用于复制的拷贝。转座和切离是独立的。2）非复制转座：转座因子直接从原来位置上转座插入新的位置，并留在插入位置上，这种转座只需转座酶的作用。非复制转座的结果是在原来的位置丢失了转座因子，而在插入位置上增加了转座因子，这可造成表型的变化3）保守转座：是非复制转座的一种类型。其特点是转座子的切离和插入类似于λ噬菌体的整合作用，所用的转座酶也是属于整合酶家族。在该过程中转座元件从供体部位被切除并通过一系列过程插入靶部位，在该过程中供体上转座元件两侧的每个核苷键都被保留 酵母双杂交的原理：1 酵母或大肠杆菌的转录因子 Gal4、LexA 的DNA结合结构域可以将一个与其融合的蛋白质分子X 诱饵 带至报告基因的上游激活序列 UAS ，并与之结合；2 与转录因子的转录激活结构域 来自Gal4或VP16 融合的蛋白质分子Y 靶蛋白 ，可通过其与X蛋白质的相互作用，将激活结构域带至报告基因的调控区；3 DNA结合结构域和转录激活结构域在空间上的靠近，重建了转录因子的功能，激活了下游报告基因的表达，表现为酵母可以在特定的培养基上生长，或在有底物X-gal时，形成蓝色菌落。4 它由三个部分组成：表达诱饵蛋白的载体、表达靶蛋白的载体、一个或多个报告基因。应用1）高灵敏度地检测蛋白－蛋白的相互作用2）确定蛋白相互作用的结构域或重要活性位点；3）寻找与靶蛋白相互作用的新蛋白；4）寻找具有药物治疗作用的小分子肽；5）寻找控制蛋白相互作用的化合物；6）蛋白相互作用图谱的绘制 如何进行规模化生产从给予的物种可以得到可采用何种表达体系以及物种密码子的偏爱性。（1）目的基因的获得：进行蛋白测序，