发酵实验室检测方法汇总.docVIP

目录 GSH检测方法（酶法） 1 GSH检测方法（普通法） 3 S-腺苷蛋氨酸（SAM）检测方法 4 ATP和ADP检测方法 6 NADH和NAD+检测方法 8 葡萄糖检测方法 10 尿素检测方法 11 无机硒检测 12 有机硒检测 14 氧化性有关酶的酶活（GPx、CAT、SOD、MDA等）检测 15 己糖激酶测定方法 16 磷酸果糖激酶测定方法 17 丙酮酸激酶测定方法 18 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶测定方法 19 普鲁兰产量及其分子量 20 总糖的测定-硫酸蒽酮法 22 蔗糖检测方法 23 NH4+浓度测定（改良的Berthelot法） 24 蛋白质含量测定-考马斯亮蓝方法 25 胞内pH（pHi）的测定 26 整理人：王玉磊（1-11） 杨波（12-15） 董颖颖（16-19） 余小六（20-26） GSH检测方法G-S-H + D-S-S-D →G-S-S-D + DSH G-S-H + G-S-S-D →G-S-S-G + DSH 谷胱甘肽还原酶的作用： G-S-S-G + NADPH →2GSH + NADP+ 其中，DSH在412 nm处有最大吸收峰。当反应体系中有微量GSH或者GSSG，足量的DTNB、NADPH和谷胱甘肽还原酶酶活，循环反应可以一直进行下去，反应液的颜色会越来越深。在反应开始的5 min中内，反应速率呈线性增加，并和体系内谷胱甘肽（包括氧化型和还原型）浓度成正比关系。如果反应体系中不存在谷胱甘肽还原酶和NADPH，则只有最初的GSH能和DTNB反应，当GSH浓度很低时，生成的颜色物质基本不可测。通过这样的循环反应，使得该方法可以检测到很低浓度的GSH，灵敏性和专一性强。 试剂μL，可测约100个样。 （3）0.3mM NADPH（分子量833.4） 称取12.5 mg溶解于50mL磷酸钠缓冲液中，4℃稳定一星期。每次用量700μL，可测70个样左右。 （4）50U/mL谷胱甘肽还原酶（GR） 如酶性质为：172U/mg蛋白，蛋白含量为9.8mg/mL，相当于1685.6U/mL酶液。取30μL酶液加到970μL磷酸钠缓冲液即可。每次用量10μL，可测约100个样。所配制的酶液在4℃可稳定一个星期甚至更长时间。 操作步骤μLDTNB，700μLNADPH和经适当稀释的样品（25mL酒精萃取后的上清液稀释400倍:10μL+3990μL H2O）μL。室温下加入10μL谷胱甘肽还原酶启动反应，测量412nm处反应体系的初始OD值和反应3min后的OD值。 标准曲线μL） 0 20 40 60 80 100 水（μL） 200 180 160 140 120 100 DTNB（μL） 100 100 100 100 100 100 NADPH(μL) 700 700 700 700 700 700 GR(μL) 10 10 10 10 10 10 注意事项参考文献Tietze, F., 1969. Enzymatic method for quantitative determination of monogram amounts of total and oxidized glutathione: application to mammalian blood and other tissue. Anal. Biochem. 29, 502-522.  GSH检测方法试剂操作步骤μL样品，于412nm处检测吸光度值，对照标准曲线，得GSH含量。 标准曲线 GSH标准液浓度（g/L）L） 4.5 4.3 4.3 4.3 4.3 4.3 Tris-HCl（mL） 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 DTNB（mL） 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 GSH标准液（μL） 0 200 200 200 200 200 注意事项 样品要最后加，加完样品后，在第0min，2min，4min时充分振荡。 参考文献Tietze, F., 1969. Enzymatic method for quantitative determination of monogram amounts of total and oxidized glutathione: application to mammalian blood an