酶标法相对定量检测Vero细胞疫苗中宿主细胞蛋白.pdfVIP

中国生物制品学杂志2005 年 3 月第 18 卷第 2 期 　Chin J Biologicals March 2005 , Vo1. 18 No . 2 ·159 · 【实验技术】 酶标法相对定量检测 Vero 细胞疫苗中宿主细胞蛋白 田博 　丁志芬 ( ) 【摘要 】　目的　建立定量检测 Vero 细胞疫苗中宿主细胞蛋白 host cell protein ,HCP 的方法 ,并用该方法检测 Vero 细胞 乙脑疫苗中 HCP 含量 。方法 　模拟 Vero 细胞疫苗生产工艺 ,制备 Vero 细胞 HCP 及其免疫血清 ,经过 DEAE Protein A Sepharose CL4B 亲和层析 ,制备纯化的抗 Vero 细胞 HCP IgG。通过对检测条件的优化 ,确立了酶标法相对定量检测 Vero 细胞疫苗中宿 主细胞蛋白的方法 ,并用该方法对 Vero 细胞乙脑疫苗的收获物 、中间产品及纯化样品收样前杂蛋白中 HCP 进行定量分析 。结 果 　该方法可以检测 Vero 细胞疫苗加入保护剂前任何阶段产品中 HCP 含量 。结论 　ELISA 法可以相对定量检测 Vero 细胞 HCP 的含量 。 【关键词 】　酶标法 ;Vero 细胞 HCP ;Vero 细胞疫苗 　　1987 年 WHO 制订了《用于生产生物制品的传 的001 molL 的 PB 作为包被液 , 以相同条件包板 , 代细胞规程》,对用于疫苗生产的传代细胞提出了要 在相 同的条件下检测 Vero 细胞 HCP 标准 品的 A ( ) 求 :残余DNA 应少于 10 ng剂量 , 同时应去除有害蛋 值 ,确定其线性曲线的相关系数 r 值 和检测的灵 白及其他潜在的不定因子[ 1] ,但没有明确限定宿主 敏度 。 细胞蛋白的含量 。1998 年 WHO 在《使用动物细胞 选用所建立的 HCP 标准品 , 以相同的包被液包 生产生物制品的规程中》对传代细胞的宿主细胞含 板 ,包被条件分别为 :37 ℃过夜 、37 ℃2 h 及 4 ℃过 量提出了要求 :疫苗的纯化工艺必须确保将宿主细 夜 。在相同的条件下检测 , 比较其线性曲线的相关 [2 ] ( ) 胞蛋白的含量去除至可接受的水平 。这就要求对 系数 r 值 和灵敏度 。 宿主细胞蛋白含量进行限定 。通过豚鼠过敏原性试 32 　封闭液和封闭条件的选择 :HCP 标准品选 验 ,确定Vero 细胞 HCP 的限量应低于 100 ng只[3 ] 。 用 005 molL p H 96 的 CB 作为包被液包板 ,4 ℃过 通过 SDSPA GE 和 Western blot 定性分析了 Vero 细 夜 。分别用 10 %牛血清 、20 %牛血清 、10 %马血清 、 胞疫苗中的 HCP 。通过优化实验条件 ,建立了相对 20 %马血清 、5 %大豆蛋白胨 、10 %大豆蛋白胨以及 定量检测 Vero 细胞 HCP 的酶标法 。 含 5 %脱脂牛奶和 5 %蔗糖的 PBS 作为封闭液和抗 体稀释液 。每种封闭液封闭2 列 ,37 ℃封闭 1 h 。洗 材料与方法