分子生物学产品常见问题分析(论文资料).pdfVIP

中国试剂网 3.9.146 分子生物学产品常见问题分析 分子生物学产品常见问题分析 问题 原因 解决办法 1) 内切酶失活 标准底物检测酶活性 2) DNA 不纯，含有SDS， 酚，EDTA 等内切酶抑制因将DNA 过柱纯化，乙醇沉淀DNA 子 3) 条件不适 （试剂、温度）检查反应系统是否最佳 换用对DNA 甲基化不敏感的同裂酶酶解， DNA 完4) DNA 酶切位点上的碱基 重新将质粒DNA 转化至dcm，dam基因 全没有被被甲基化 型的细菌菌株 内切酶切 换用不同切割非甲基化位点的同裂酶消化 割 5) DNA 酶切位点上没有甲 DNA （如San3A I 代替Dpn I) ，重新将质 基化 （如DpnI ） 粒转至dcm+dam+菌株中扩增 6) DNA 位点上存在其它修 将DNA 底物与λDAN 混匀进行切割验证 饰 7) DNA 不存在该酶识别顺换用其它的酶切割 DNA 或过量酶消化进 序 行验证 DNA 切1) 内切酶活性下降 用510 倍量过量消化 割不完全2) 内切酶稀释不正确 用酶贮藏液或反应缓冲液稀释酶 3)DNA 不纯，反应条件不佳同上 4) 内切酶识别的DNA 位点 上的碱基被甲基化或存在其同上 它修饰 5) 部分DNA 溶液粘在管壁 反应前离心数秒 上 6) 内切酶溶液粘度大，取样 将内切酶稀释，增大取样体积 不准 7) 酶切后DNA 粘末端退火电泳前将样品置65℃保温510 分钟，取出 中国试剂网 3.9.146 后置冰浴骤冷 8) 由于反应溶液、温度、强使用标准反应缓冲液及温度，避免强烈振 烈振荡使内切酶变性 荡 9) 过度稀释使酶活性降低 适当稀释酶液，反应液稀释的酶不能贮藏 10)反应条件不适 使用最佳反应体系 11)识别位点两侧插入了可 加大酶量510 倍 影响酶切效率的核酸顺序 检查反应条件：甘油浓度大于 12%，盐度 1) 内切酶星状活性 过低，Mn2+ 的存在及酶：DNA 值过大均 DNA 片 均可导致星状活性，降低酶的用量 段数