人IgMμ链恒定区各肽段的基因合成原核表达及免疫原性分析.pdf

UniversitatisMedicinalisAnhui2013 ·995· 安徽医科大学学报Acta Sep；48(9) ◇基础医学研究◇ 人IgMl乩链恒定区各肽段的基因合成原核表达及免疫原性分析 张婧1，章萍萍1，祁培培2，吴莉莉1，刘超2，潘卫2，邓松华k3 摘要 目的 全基因合成并原核表达免疫球蛋白M的重链 病毒等微生物感染后几周之内就可以检测出。冈此 (IgMl山链)及其各肽段，与天然的IgM、IgMl山链和IgG进行 血清中IgM水平的测定常被用于临床免疫检验早期 免疫原性的分析比较，进一步了解IgMtz链恒定区的结构与诊断和进行免疫研究。然而用常规的方法制备抗入 功能。方法 根据GenBank数据库IgMtx链恒定区(CHl一 IgM抗血清的来源少，制备方法较繁琐、价格高，且 CH4)的cDNA序列并进行必要的大肠杆菌密码子优化，利 在临床检测时特异性不高及试剂不易标准化¨o。 用重叠延伸PCR(OE—PCR)体外基因合成人IgM¨链恒定 因此，抗人IgMl山链单克隆抗体常被用于捕获血液 区全长(CHl一CH4)及其截断片段CHl一CH2和CH3一CH4。 中的IgM，用于某些传染病的早期诊断。天然的 原核表达并纯化相应的3种融合蛋白PET32a—rM斗CHl一 IgMl山链性质不稳定、易降解、制备方法代价昂贵。 CH4、PET32a．rMIxCHl一CH2和PET32a—rM肛CH3一CH4，并分别 该研究希望通过基因合成的方法人工合成IgMl山链 免疫BALB／c小鼠。同时设天然人IgM、IgM斗链和IgG免 疫组为对照。再用ELBA法检测6种血清，分析比较其抗原恒定区，并对合成的IgMIx链的恒定区及恒定区各 性及免疫原性。结果 利用OE—PCR方法体外成功合成肽段的免疫原性和特异性进行研究，进一步了解 l 359 bp的IgMl山链 bp的IgM斗链(CHI—CH4)全长基因、651 IgMIx链的性质，为特异性的体液免疫检测奠定实验 CHl CH2和708 bp的IgMtx链CH3CH4，并构建相应原核表 基础。 达质粒PET32a—rMtxl-4、PET32a-rMIxl-2和PET32a—rM∞-4， 血清ELBA检测结果显示：①IgG免疫原性IgMIgMIx链1材料与方法 rMpd4rMl山l一2rM∞-4；②IgM免疫的血清与IgG有 1．1材料 较强的交叉反应性，IgG免疫的血清与IgM也存在较强的交 叉反应性；IgMl山链和重组“链的各肽段免疫的血清与IgG 均无明显的交叉反应性。结论 重组的IgMIx链及其各肽 段与天然IgMpL链有着相似的免疫原性和特异性，为基因工(该表达载体蛋白包括由6个连续的His组成的标 程得到抗人IgM恤链单克隆抗体奠定了研究基础。 关键词免疫球蛋白M；免疫球蛋白“链；酶联免疫吸附测 自美国Novagen公司；E．coliTopl0均由第二军医 定法；单克隆；抗体 大学微生物学教研室保存；天然的人IgM、IgG及 中图分类号R392．23 IgMtx链均购自美国Sigma公司。 文献标志码A文章编号1000—1492(2013)09—0995—06 1．1．2试剂盒与工具酶DNA凝胶回收试剂盒、