靶向喉癌的蜂毒肽重组抗体的构建及鉴定.pdfVIP

靶向喉癌的蜂毒肽重组抗体的构建及鉴定.pdf

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Vol.35 高等 学校 化 学 学报 No.12 2014年12月 CHEMICALJOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 2551~2555 doi:10.7503/ cjc 靶向喉癌的蜂毒肽重组抗体的构建及鉴定 1,2 2,3 3 2,4 2,5 2 孙丽丽 ,王浩然 ,徐一鸣 ,费 丹 ,付婷婷 ,管国芳 (1. 吉林省肿瘤医院头颈外一科,长春 130012;2. 吉林大学第二临床医院耳鼻咽喉科,长春 130041; 3. 吉林大学动物医学学院,长春 130062;4.吉林大学中日联谊医院超声科,长春 130033; 5. 日照市东港区人民医院, 日照276800) 2+ 摘要 利用大肠杆菌表达系统制备了重组融合蛋白antiEGFR/ MEL,并用Ni 层析柱对其进行了纯化. 该重 组蛋白中抗表皮生长因子受体(antiEGFR)单链抗体(scFv)主要靶向喉癌细胞中的EGFR,而蜂毒肽(MEL) 主要抑制肿瘤细胞增殖. 采用SDS和Western blot检测证明了antiEGFR/ MEL 的有效表达. 共聚焦显 微镜和流式细胞术实验结果表明,antiEGFR/ MEL可与Hep-2肿瘤细胞有效结合,而几乎不与EGFR 阴性的 Jurkat细胞结合. 噻唑蓝(MTT)检测结果说明,antiEGFR/ MEL可有效抑制人喉癌细胞Hep-2 的增殖. 以上结 果表明,antiEGFR/ MEL能够有效靶向EGFR 阳性肿瘤细胞,并有效抑制肿瘤细胞增殖,有望应用于EGFR 靶向肿瘤治疗. 关键词 喉癌;表皮生长因子受体;单链抗体;蜂毒肽;原核表达 中图分类号 O629.9;Q511;R739.65 文献标志码 A [1,2] 喉癌发病率逐年上升,已成为严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一 . 虽然现有手段对喉癌的治 疗卓有成效,但对其Ⅲ~Ⅳ期、复发及转移等病情的疗效不容乐观,仍有30%~40%的患者死于复发 [3,4] 或转移 . 近年来,肿瘤的抗体治疗研究发展迅速,有望解决传统肿瘤治疗方法难以根治肿瘤的 [5,6] 缺陷 . 表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)在多种肿瘤细胞内过表达,且与肿瘤 [7,8] [9,10] 的发生、发展及其耐药性等生物学进程密切相关 . EGFR 的异常变化也是喉癌的显著特点 ,靶 [8,9] 向EGFR 的头颈鳞状细胞癌治疗药物(西妥昔单抗)已经面世 . 蜂毒(Bee venom,BV)作为免疫制 [11] 剂用于治疗免疫相关疾病应用已久,其在肿瘤治疗方面的作用也逐渐被认可 . 蜂毒肽(Melittin, MEL)是蜂毒的主要成分,其通过激活PLA2而发挥的细胞毒作用已被确认

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