不同冷冻保护剂和冷冻方法对小鼠耳皮肤成纤维细胞冻存效果的影响.pdf

动物医学进展，2012，33(5)：69—74 in Medicine ProgressVeterinary 不同冷冻保护剂和冷冻方法对小鼠耳皮肤 成纤维细胞冻存效果的影响 肖 雄，邓玉金，赵海龙，吴有博，李跃民+ (西南大学动物科技学院，重庆400715) 摘要：通过比较不同冷冻保存方法和冷冻保护剂对小鼠耳皮肤成纤维细胞冷冻一解冻复苏后细胞存活 率、48h贴壁率和细胞生长曲线的影响，筛选适宜的小鼠耳皮肤成纤维细胞冷冻保存方法和冷冻保护剂。 结果表明，以100mL／L二甲基亚砜(DMSo)作为冷冻保护剂进行小鼠耳皮肤成纤维细胞冷冻保存时，方法 3处理组解冻复苏后细胞存活率和培养48 mL／LDMSO作为冷冻剂的细胞贴壁率显著高于 于方法1和方法4。采用方法3进行冷冻保存时，以100 100 mL／L mL／L胎牛血清(FBS)+100 细胞的冷冻保存。 ， 关键词：冷冻保存；解冻；耳皮肤成纤维细胞；小鼠 中国分类号：S852．165 文献标识码：A 耳皮肤成纤维细胞因具有取材方便、易获取、体 选适宜的小鼠耳皮肤成纤维细胞的冷冻保存体系， 外增殖能力强、细胞形态结构稳定、较易进行传代培 为小鼠耳皮肤成纤维细胞用于体细胞核移植和重编 养和不易发生转化等特点，在体细胞核移植、转基因 程为多能干细胞等研究奠定基础。 技术、治疗性克隆和诱导性多能干细胞等研究领域 1材料与方法 具有重要的应用价值。但是，体外培养的细胞，随着 1．1材料 传代次数的增加，细胞各种生物学特征会逐渐发生 1．1．1 实验动物 昆明系小鼠，8周龄～lO周龄雌 鼠，体重23 变化，同时，长期传代也会造成资源浪费。因此，在 g～28g，购于重庆市中药研究所动物研 细胞传代过程中，需要适时进行细胞冷冻保存，以保 究中心。 证体外培养细胞的质量，又便于取用。液氮 (一196℃)冷冻保存细胞，理论上是无限久的，但由 enediaminetetraacetic 于目前技术局限，冻存时间越长，细胞复苏后存活率 州四季青生物工程材料有限公司产品。 越低。因此，细胞在不同冻存温度、不同冻存方法和 C02培养箱(3111)The肌oForma公司产品； 不同冷冻保护剂下冻存效率存在差异。本试验以 倒置显微镜(T—DH)NikonJapan公司产品；超低温 sul一 DMEM为基础培养液，以二甲基亚砜(dimethyl Electron 冰箱(720)ThermoCorporation公司产品； foxide，DMs0)或甘油(glycerol，GL)作为冷冻保护 液氮罐(YD孓30B)成都液氮容器厂生产。 bovine 剂，并添加胎牛血清(fetal serum，FBS)组成 1．2方法 冷冻保护液，分别采用4种冷冻降温方法，对体外培 1．2．1 小鼠耳皮肤组织的获取颈椎脱臼法处死 养的第3代小鼠耳皮肤成纤维细胞进行冷冻保存。 小鼠，手术刀片剔除耳毛，经酒精消毒，用无菌眼科 通过比较