分子生物学实验理论讲授.pptVIP

重组人白介素-18(rhIL-18)基因工程菌的构建 分子生物学实验-理论讲授 图示：分子克隆 重组DNA技术所需的基本条件 用于核酸操作的工具酶 用于基因克隆的载体 用于基因转移的受体菌或细胞 用于核酸操作的工具酶 限制性核酸内切酶 连接酶 DNA聚合酶 限制性核酸内切酶 Taq DNA聚合酶 1. 特点： 分离自水生栖热菌，分子量为94,000，最适反应温度75℃， 对95℃高温具良好稳定性，该酶不存在3’→5’外切酶活性 2. 用途： 主要用于DNA的体外扩增，经25次循环后才进入酶的反应稳定期，一个DNA 分子因而可被扩增4×106倍。 DNA扩增技术又称为聚合酶链式反应(PCR)，它包括以下三个步骤： DNA模板变性(95℃)→与DNA引物退火(45℃)→引物延伸（72℃) 用于基因克隆的载体 是用来在生物学寄主和试管间‘传送’克隆的序列的DNA分子 (如从细菌到试管再到植物细胞)。 其共性有四点： 启动自发复制的能力 含有遗传标记 (通常是显性的) 供选择 多个限制酶切位点以利于插入克隆的DNA 非必需DNA序列尽可能少，以克隆更大片段 pUC系列质粒 2.7Kb的双链DNA质粒 一个氨苄青霉素抗性基因 一个多克隆位点 实验室常用的基因工程受体 大肠杆菌： 用于接受质粒：DH5α、TB1、JM109、