小鼠巨噬细胞功能测定.ppt

1.实验目的 了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理； 熟悉和掌握巨噬细胞吞噬试验的方法。 2.实验原理 巨噬细胞具有吞噬、分泌和参与免疫应答的各种功能，是机体免疫水平和功能的重要指标，与抗肿瘤免疫也有重要关系。本试验将鸡红细胞注入小鼠腹腔时，会被腹腔中的巨噬细胞吞噬。取小鼠腹腔液涂片、染色，在显微镜下观察可见鸡红细胞被吞噬的现象。计算吞噬百分率和吞噬指数，可判断巨噬细胞的吞噬功能，据此可判断机体的非特异性免疫水平。 5.注意事项 （1）涂片的薄厚要适当，否则影响计数。 （2）小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。 （3）如小鼠腹腔液过少，可腹腔注入适量Hank’s液揉动 后再取。 （4）剪开小鼠腹腔时应避免出血，否则将影响试验结果。 （5）被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化，时间过短未 被吞噬，必须掌握好吞噬作用时间。 小鼠巨噬细胞功能测定 3.实验器材 （1） 器具：注射器、离心管、载玻片、平皿、烧杯、橡皮乳头、解剖剪和镊子、解剖盘。 （2） 材料：无菌生理盐水、Hank’s液、6%淀粉肉汤液、瑞氏染色液、 1%鸡红细胞悬液、 小鼠。 4.实验方法（小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能体内测定法） （1）实验前3d，给小鼠腹腔内注射无菌6%淀粉肉汤液1ml。 （2）实验当天，给小鼠腹腔注射1％的鸡红细胞悬液1ml ，轻 揉腹部使鸡细胞分散，令其活动20~30min。 （3）然后颈椎脱臼处死小鼠，仰卧固定。常规消毒腹部皮肤， 左手持镊提起腹中部皮肤。右手用剪子剪长5mm的小口， 从剪口处朝头、尾部用力，撕开皮肤，暴露腹壁。 （5）提起腹前壁，避开血管剪一小口，用毛细吸管吹吸混匀腹腔内液体，并收集于试管内。 （6）在干净的载玻片上滴加一滴腹腔液制作涂片 。待涂片晾干后，瑞氏染液染色5min。 （7）结果判断：高倍镜/油镜下镜检。镜下可见巨噬细胞核呈蓝色，被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形，其胞浆呈红色而核被染成蓝色。计数巨噬细胞吞噬鸡红细胞情况，计算吞噬百分率和吞噬指数。 ①吞噬百分率：即100个巨噬细胞中吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数。 ②吞噬指数：将100个巨噬细胞中所吞噬的鸡红细胞总数除以100即得吞噬指数，即平均每个巨噬细胞吞噬的鸡红细胞数。 未被吞噬的鸡红细胞 吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞