微生物实验报告：水中细菌总数和大肠菌群的检测.docVIP

实验六 水中细菌总数和大肠菌群的检测 摘 要：本实验以测定公园河流水的细菌总数和大肠菌群的数量，来测定特定地点的水质情况。初步介绍了一种通用的方法来检测水源的健康指标，判定水体的质量。对该实验点的水源作出了定性的评价，以及关于试验中如何提高梯度重复的精度的分析。 关键字：河流水；细菌总数测定；大肠菌群；EMB培养 前言 各种天然水中常含有一定数量的微生物。水中细菌总数往往同水体受有机污染程度呈正相关，因而是评价水质污染程度的重要指标之一。细菌总数是指1mL水样中所含细菌菌落的总数[cfu/g(mL)]，可用稀释平板计数法检测。水中大肠菌群的数量可用来判断水源是否被粪便污染，并可间接推测水源受肠道病原菌污染的可能。 特征：G-无芽孢杆菌，兼性厌氧、在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气。 多管发酵法 初发酵：适当稀释样品，乳糖发酵培养，产酸产气； 分离培养：伊红美蓝（EMB）平板上划线分离，出现紫色、粉红色特征性菌落； 复发酵验证：挑取特征性菌落进行乳酸复发酵验证。 材料和方法 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：用于水中细菌总数测定 牛肉膏5g，蛋白胨10g， NaCl 5.0 g，琼脂8g， 蒸馏水1000ml； pH 7.0 乳糖胆盐蛋白胨培养基：用于初发酵 1×：蛋白胨 20g、牛胆盐 5g、乳糖 10g、0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL（调pH值后加）、水 1000mL、pH 7.2－7.4 三倍浓缩液（3×）：除水以外，其余成分取三倍用量 分装：1×的培养基分装9ml/管， 3×的培养基分装5ml/管或50ml/瓶，均装上德汉氏小管。 灭菌条件：115℃ ，15min。 EMB培养基：用于大肠菌群菌落鉴定 脱水培养基，按说明书操作，水用量为90%。 水源：紫竹院河水 仪器： 高压灭菌锅、无菌培养皿、试管、吸管、接种环 、德汉氏小管、温箱、载玻片、酒精灯、显微镜等。 试剂 ： 牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂粉，伊红美兰琼脂培养基、水、乳糖、0.04%溴甲酚紫水溶液、胆盐、革蓝氏染色试剂 具体实验步骤： 1），相关器械的灭菌操作，以及前往紫竹院取少量的样品水。 2），按照上述的配料，无菌操作配置培养基。 3），细菌总数的测定：取上述样品水，一次稀释10-1,10-2,10-3,3个浓度。对于每个浓度，取1ml稀释液加入冷却好的牛肉膏蛋白胨培养基中，立即混匀，每个浓度重复一次。将平皿倒置培养在37℃的温箱24h，计算平皿的细菌总数。 4），大肠菌群的测定：将样品水稀释成100,10-1,10-2,3个梯度。 实验结果与数据分析 1，细菌菌落总数 组别 稀释浓度及菌落数 平板菌落状况 报告方式选取 菌落总数（cfug , cfu/ml 10-1 10-2 10-3 1 12 0 0 均小于30 最低稀释度下菌落数 × 稀释倍数 8.0×10 2 4 0 0 平均 8 0 0 2,大肠菌群总数 实验结果 原溶液 10-1 10-2 ck 初发酵 产酸 + + + + + - 产气 + + + + + - EMB 紫黑色 + + + + + - 粉红色 - 革兰氏染色 G- + + + + + - - 结论 + + + + + 0 阳性管数 5 0 0 3，EMB 数据值计算 查表可得，MPN= 接种量最大的管：1ml 每100ml水样中菌数最大可能值：230 95%可信限值 上限：700 下限：70 水样的分析得出这样的结果：细菌总数：80个/mL 大肠菌群数：2300个/L 大肠菌群数占细菌总数：2.88%。 根据我国《生活饮用水卫生标准》GB5749-85规定 细菌总数不超过100个，已达标。 大肠菌群不得超过1000个，超标。 经过严格的消毒处理，大肠杆菌不超过10000个，水样达标。 结论：从上述的水样分析，我们可以得出此处的河流水污染不是很严重，作为景观水，已经达到了标准，但是此类水是不能作为饮用水的，可能存在一些粪便的污染，导致大肠菌群的数量过高，倘若经过严格的消毒灭菌，才能饮用。 实验讨论： 1， 大肠菌群的定义是什么？、为什么要选择大肠菌群作为水源被肠道病原菌污染的指示菌？ 大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧