PCR扩增和测序的引物设计(论文资料).pdf

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2015-09-26 发布于重庆
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警示：在我们的手册中介绍的实验可能具有潜在的危险性，要求操作人员具有相当的安全训练、特殊装备、以及相关安全部门的监督。作为实验操作员的你承担全部的责任、义务和由于实施安全步骤和措施带来的危险。麻省理工大学没有责任、义务或承担由于实施本材料中内容所引起的危险。法律声明 PCR扩增和测序的引物设计（菲尔原则） 1. 平均引物长度(模板同源区)：20bp 2. G+C 含量尽可能接近 50％ 3. G 和 C 残基十分均匀地分布于引物中(不要全部集中在一块) 4. 引物 3末端大多数应当符合如下模式：……SSW S 代表一个 G 或 C 残基，W 代表一个 A 或 T 残基 5. 5端大多数核甘酸对应的模式是“SS……” 6. 检查所有引物防止形成“引物二聚体”，也就是单个引物或一套引物在 3端都不能相互粘着 7. 限制酶识别位点可以合成在引物的 5末端 8. 碱基错配允许在引物中发生，但不能发生在 3末端的 9 个碱基中 9. 再次检查引物和目标序列是否匹配，目标序列是否从 5到 3开始复制 © P. Lessard 2002, 保留所有权利。