RT-PCR检测慢性粒细胞性白血病不同病期bcr-abl基因及临床意义.pdf

李红玲任守义 bc卜abl基因是t(9；22)染色体易位产物，见于90％以上慢进行第二次扩增。④PcR产物的测量：将第二次PcR扩增产物 性粒细胞性白血病(o咀，)及10％～25％的成人急性淋巴细胞10出加样于台EB染色剂的琼脂糖凝胶中．电泳20～30分钟， 性白血病(以下称急淋)。babl基因重排是CML最重要的分紫外检测仪观察结果。每次实验设阳性对照及阴性对照。阴性 子生物学特征。检测该基因对cML的诊断、鉴别诊断及预后 对照为阴性，阳性对照为阳性视结果为可靠。 判断具有重要意义。我们应用逆转录．聚合酶链反应(RT-PclR)2结果 检测cML患者骨髓及(或)外周血habI基因，为临床诊断、鉴 别诊断、预后判断提供依据。 例急变者中，2倒未采到慢性期标本，故只进行急变期分析，此2 1材料与方法 铡b盯／abl基因均(+)。另4倒急变者中．2倒慢性期、急变期 1．1病例cML患者26例，男16例，女lO例，按文献[1]标 准诊断。其中慢性期20铡，急变期6例，对其中4侧急变者分基因(一)，1铡急变期bcr／枷基因(+)，Ph染色体(一)，急变期 别采取慢性期、急变期标本各2份，共30份标本进行检测。 babI基因(+)，Ph染色体(+)。 1．2 方法cⅦ，PcR诊断试荆购于华美科技公司及美国3讨论 P协嘟公司。方法：①RNA抽提：取患者外周血或骨■，d， 早在1960年N口剥l和HlIn球rf耐就在。沮，患者的自血 分离白细胞，用RNA抽提缓冲液溶解细胞，以10000r／硒n离心病细胞中发现了Ph染色体．1990年Dhky等研究肯定了b姒 去细胞校．再用酚：氯仿抽提。②反转录第～次PcR扩增：将反 基因在白血病发病中起直接作用。近年来有学者发现b盯断裂 RNA酶抑制刺，再 部位、bd．枷基因表达水平与c加．急变有关。 转液A(含引物，4xd卜Ⅱ鸭等)14一加入1m 加^2出反转录酶．加3脚RNA，反应总体积加忸，于42℃保温我们发现l倒c^也急变者慢性期PIl染色(一)、b小abI基 30分钟后，立即按下列条件进行第一次扩增：93℃变性45秒， 55℃退火45秒．72℃延伸60秒，共35循环。72℃延仲5分钟。能系其慢性期染色体阳性细童数量极少，不易被发现。说明 PcR检测时BM基因优于细赡遗传学查染色体，其特异性高， @第二次Pal扩增：将17m反应藏B加入lmDNA聚台酶中， 敏感性强。结果稳定，在有的Ph染色体阴性cML患者中也可 再加2出第1次扩增产物，总体积2叭，用第一次PcR反应条件 基金嘎目：甘肃省科委科学事业费簧鼬项目((礴∞2一a3—012) 万方数据 i监然兰里￡!鲤l兰￡星!§堂墨!Q塑 谈阳性结果。进一步揭示，PcR检测bcrabI基因更有利于急变期}蛇·abl基(一)检测。亦支持此论点。分析其慢性期、急 cML分类诊断．CML根据有无Ph染色体分为Ph染色体阳性 变期结果不一致的原因，考虑町能与化疗影响lrr—abl基因的表 和阴性两大类，bc卜abl基因阳性与阴性的患者．1I缶床表现和预后达有戈外，其急变是否存在其它基因异常，需进行更深人的研 有所不同。敝检测bc卜abl基因有利于判断预后。我们认为，对 究，亦需要对大规模(、ML不同病期的动态观察。 Ph(一)拟诊rML者，仍需检查habl基因，无论是否存在细胞总之，bc}abl基因的形成在CML的发生发展中，具有极为 重要的作用，虽然目前对cML的发病机制进行了一些研究，但 遗传学t可见的Ph染色体，cML患者只要存在1)cr／abl基因， 即Ph+／bc卜幽l‘或Ph／bcr—abl+者可诊为c札，如Ph一／bc卜仍有许多问题有待进一步研究，其急变分子机制十分复杂，要真 abl_则不是CML。 正实现在基因水平上列cML进行诊断、分型、鉴别诊断及推测