人PINK1抗血清的制备及其免疫活性物质在大鼠脑组织中的表达.pdfVIP

2010盈 首都医科大学学报 Jun．2010 6月 No．3 第3l卷第3期 Joumalof Medical V01．31 Capital University [doi：10．3969／j．issn．1006-7795．2010．03．012】 ·基础研究· 人PINKl抗血清的制备及其免疫活性物质 在大鼠脑组织中的表达 李继胜1 李尧华2 李 昕2 于顺2 王年强1 高 华1 孙晓红1 杨 慧¨ (1．首都医科大学北京神经科学研究所北京神经再牛修复研究重点实验室教育部神经变性病学重点实验室； 2．首都医科大学宣武医院老年病研究所神经生物学研究室，教育部神经变性病重点实验室) 【摘要】 目的制备帕金森病相关蛋白PINKI抗血清并检测其在大鼠脑组织中的表达特征。方法制备人PINKl基因重组蛋 白，免疫新西兰大耳白兔获得抗PINKl抗血清；通过盐析法初步纯化、Western blotting法鉴定抗血清的敏感性和特异性、免疫组 化法检测PINKl在大鼠脑中的分布。结果人PINKI基因重组蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达；纯化蛋白制备兔抗 血清经盐析纯化后，兔抗人PINKI抗血清特异性识别人PINKI基因重组蛋白及大鼠脑匀浆中40000和66000的蛋白质，与预期 结果一致；免疫组化染色显示PINKI广泛分布在嗅球、皮质、海马、纹状体、小脑、黑质和红核。结论制备了一种兔抗人PINKI 多克隆抗血清；PINKl广泛分布于大鼠中枢神经系统；为以后深入研究PINKl表达的组织分布、细胞内定位及其生物学功能提供 了有效地实验工具。 【关键词】PINKl；抗血清；大鼠；重组蛋白 742．5 【中图分类号】R Antiserum PINKlandits of Human PreparationPolyclonal against inRatBrain Expression LI Yao．hua2，LIXin2，YUShun2，WANG Hual，SUN Huil。 Ji．shen91，LI Nian—qian91，GAOXiao．hon91，YANG institute Medical CenterNeural laboratoryfor (1．8eqingforNeuroscience，CapitalUniversity，＆qingfor Regeneration＆Repair，get Disease NeurodegenerativeoftheMin蠡tryofEducation；2．DepartmentofNeurobiology，eeiji,曙lnst础uteofGeriatrics；XuanwuHospital， Medical Diseases ofEducation) Capital Univers缸，，，16yLaboratoryforNeurodegenerativeofMinistry To ofParkinson PINKlinratbrain．MethodsTo 【ABSTRACT】Objectiveinvestigateexpression disease(PD)relatedprotein obt