人类生精相关基因TSARG6的原核表达和抗体制备.pdfVIP

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2015-09-29 发布于湖北
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人类生精相关基因TSARG6的原核表达和抗体制备.pdf

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人类生精相关基因TSARG6的原核表达和抗体制备.pdf

第39卷第4期第474页华巾科技大学学报(医学版) V01．39No．4P．474 TechnolH 201 0 2010年8月 ActaMedUnivSei uazhong Aug．人类生精相关基因TSARG6的原核表达和抗体制备* 刘刚，卢光绣△ 中南大学生殖与干细胞工程研究所，长沙410078 摘要：目的构建人类生精相关基冈pGEX—KG／TSARG6原核表达载体，原核表达、制备并鉴定多克隆抗体。方法 pGEX—KG中，经测序鉴定后将重组质粒转入E．coli PAGE和Westernblot鉴定融合蛋白，免疫家兔，制备抗7ISARG6多克降抗体，Westernblot检测抗体特异性。结果经 JMl09细菌经IPl、G37。C诱导3h后测序验证，我们成功构建了pGEX—KG／TSARG6莺组质粒；转化莺组质粒的E．coli 高效表达GST／TSARG6融合蛋白；Westernblot实验结果显示制备的多克隆抗体可与原核表达融合蛋白特异性结合。结论成功进行了TSARG6基因的原核表达和多克隆抗体制备，为TSARG6的后续功能研究提供了有力的上具。关键词：TSARG6基因；原核表达；多克隆抗体中图分类号：R349．6DOI：10．3870／j．issn．1672—0741．2010．04．011 and ofTSARG6Gene ProkaryotieExpressionAntibodyPreparation RelatedtoHuman Spermatogenesis Liu Gang．I。uGuangxiu△ 41 Institute andStemCell South 0078，China ofReproduction Engineering，CentralUniversity，Changsha Abstract Toconstructa vector ofhumanTSARG6 ObIiective prokaryoticexpressionpGEX—KG／TSARG6 gene，related to the and rabbit The frame identify polyclonalantibody．Methodsopenreading spermatogenesis，detectexpression，prepare into (ORF)ofTSARG6was fromhumantestis PCR，andsubcloned vector amplified cDN人libraryby prokaryoticexpression wcreidcntified fusion wase