LC色谱柱的选择方法.pdf

HPLC 色 谱 柱 选 择 东曹达（上海）贸易有限公司 色谱柱的选择 色谱柱的选择 HPLC 方法开发时首先要: 了解方法的目的（分析？制备？） 了解样品性质（极性？酸碱性？） 选择合适的色谱柱 色谱柱的选择 色谱柱的选择 色谱柱和流动相的选择是色谱技术的核心之一 色谱柱的选择是方法开发的一个重要环节 选择合适的色谱柱可以缩短方法开发所需要的 时间、并且使开发的方法更稳定 在不合适的色谱柱上进行方法开发通常需要更 长的时间、并且成功率较低 色谱柱的参数 色谱柱的参数 色谱柱的参数远比一般认为的要多： 柱长， 内径， 例如250*4.6mm. 粒径， 3um, 5um, 10um等 孔径，60A，80A，100A，120A等 柱的物理性质 2 2 2 比表面积， 180m /g-350m /g（ODS-100V为450m /g） 基质：硅胶，聚合物等 硅胶表面性质 载碳量， 10-20%(ODS-120T为22%) 柱的化学性质 键合试剂， C18,C8, CN等 封端 样品性质决定柱的化学性质 样品性质决定柱的化学性质 样品结构 溶解性（有机溶剂、水） pH值 极性 酸碱性 分子量 分离目的决定柱的物理性质 分离目的决定柱的物理性质 分析? 制备? 快速分析?（如Super-ODS） 含量分析? 杂质检验? 所有组分分离? 色谱柱的参数 色谱柱的参数 柱长、内径 一般柱长2.0-250mm，柱越长，分离度越高，但柱压更高，分离所 需时间更长 分离度与理论 塔板数的平方根成正比，所以增加柱长并不是最有 效的分离手段。一般情况下15cm, 5um的填料可以提供足够的塔板 数 内径：1-2mm LC-MS柱，4.6mm分析柱，10mm以上的半 制备和 制备色谱柱 HPLC仪器的柱外效应-不同的仪器设备配置有相应的最佳流速，因 此适用于不同内径的色谱柱 色谱柱的参数 色谱柱的参数 基质 硅胶： 最通用的基质，强度大，化学修饰容易，但使用的pH值范围 有限（一般为2-8， 特殊修饰的可以使用到1-12）。 下面的介绍也 主要是基于硅胶基质的色谱柱技术 聚合物基质：化学稳定，应用 pH范围宽, 但强度不够大， 批重复 性相对较差。 商品化的色谱柱不多，价格较贵，如Octadecyl-2PW 球型: HPLC 使用 无定型: 中压色谱使用 色谱柱的参数 色谱柱的参数 粒径 粒径越小，分离越快, 柱效越高。但柱压力越高，柱容易被污染， 寿命低 LC-MS和常规分析柱通常使用5 μm填料。3 μm填料使用的困难程 度大，一般非必要时不使用(ODS-100V) Super-ODS为2 μm 填料，UPLC为1.7 μm填料 3cm 以下的制备色谱柱通常使用5-10 μm填料 更大内径的制备色谱柱通常使用更大的粒径，如10 μm, 或20 μm 色谱柱的参数 色谱柱的参数 孔径 孔径小，含孔率高，则 比表面积大，载碳量高 化合物在孔内分离 孔径大小必须和分子大小相匹配，分子必须能进入孔内，一般