实验三细菌的芽孢染色和鞭毛染色.pptVIP

实验三细菌的鞭毛染色和芽孢染色 * * 一、目的与要求 学习细菌的芽孢染色和鞭毛染色方法。 观察芽孢杆菌形态特征和鞭毛的形态特征。 巩固无菌操作技术和显微镜的油镜使用。 二、基本原理 1、鞭毛染色法 细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为0.01－0.02μm，所以不能用光学显微镜直接观察到，必须采用特殊的染色方法，才能被观察。 鞭毛染色原理是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。 二、基本原理 2、芽孢染色法 由于芽孢壁厚、透性低、不易着色，因此用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。 三、实验器材 1、菌种：普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌 2、染色剂：硝酸银鞭毛染色液:(A液、B液）、芽孢染色液:（5%孔雀绿染液、0.5%番红染液） 3、仪器或其他用具：载玻片、生理盐水、酒精灯、木夹、接种环、双层瓶、显微镜、擦镜纸、滤纸等 四、操作步骤 1、鞭毛染色（硝酸银染色法） 取一滴无菌水，滴于玻片一端　　　取一环菌置于无菌水中，让菌体利用鞭毛运动开　　 然后玻片倾斜，让菌液缓缓流向玻片的另一端　　 室温自然干燥　　 滴加染液A 3-5min 水洗 用染液B冲去残水　　 滴加染液B　1-1.5min水洗　　 干燥　　 镜检 结果：菌体深褐色，鞭毛淡褐色并呈波浪形。 操作要点： ①菌种的培养时间为8-10h。 ②玻片要求光滑、洁净。 ③勿用接种环涂布制片。 ④制片后要自然干燥，不能放在火焰上干燥。 ⑤为使鞭毛清晰可见，水洗时尽量把载玻片冲干净。 四、操作步骤 2、芽孢染色 涂片　　 干燥固定　　 滴加孔雀绿染液 夹住玻片，微火加热至蒸汽冒出，维持5min 水洗　　 番红复染　6min　水洗　　 干燥　　 镜检　结果：芽孢绿色，营养体红色。 操作要点： 加热过程中，要及时补充染液，切勿让涂片干涸。 在冒蒸汽的条件下，维持足够的时间，否则染液不易进入芽孢内。 待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗，以免细菌被水冲掉。 尽可能地把孔雀绿染液冲洗干净，以免影响番红的复染。 *