固体生物质对扩张床吸附的影响和方法的研究.pdf

摘 要 Bed 扩张床吸附(Expanded 的一种新型生化分离技术，最大特点是可以从含有固体生物质颗粒(如细胞、细 胞碎片)的料液中直接捕获目标物，集固液分离、浓缩和初期纯化于一个单元操 作之中，可以缩短分离步骤、减少活性物质损失、提高产品收率、节省分离成本， 体现了生物分离过程的集成化优势。论文在综述扩张床吸附原理、特点和操作方 式的基础上，集中讨论了固体生物质颗粒对扩张床吸附的影响，以及借鉴胶体化 学的zeta电位概念来描述静电相互作用的设想，阐明了扩张床吸附过程设计的特 殊性和重要性，提出了本论文的研究思路——建立并完善固体生物质颗粒影响的 评价手段，形成合理的扩张床吸附过程设计策略，并采用实例证明该策略的合理 一陛和实用性。 扩张库在吸附过程中必须保持稳定分级的流态化，这是扩张床吸附得以实现 的关键。细胞或细胞碎片与扩张床吸附剂间的相互作用，必然影响扩张床的稳定 性，因此论文首先针对扩张床吸附过程的特殊性，采用特殊的示踪剂，测定含有 圆体生物质颗粒进料时的停留时间分布(RTD)，以正确评价扩张床在真实进料 中的稳定性。论文选择特殊离子(Li+和Bf)作为RTD示踪物，选用离子选择 性电极实时测定流动相中特殊离子浓度，建立了数据采集和分析系统，考察了离 子选择性电极的工作范围、响应时间、流速、固体生物质颗粒浓度、脉冲离子浓 度和脉冲量的影响，确定了适宜的测定条件。以面包酵母为模型生物质、基因重 组Kcoli匀浆液为实际应用对象，证明了本论文建立的离子选择性电极法可以很 好进行含有固体生物质颗粒进料时的RTD测定，是一种可以评价真实操作条件 下扩张床稳定性的有效手段。 “离子选择性电极RTD分析法”的使用中发现一些局限性，如原料消耗液 量大、测定周期较长、需要特殊电极等，有必要建立一个更为简便的测定方法来 评价固体生物质颗粒与吸附介质间相互作用，并对固体生物质颗粒的影响进行定 量表征，以简化扩张床吸附的过程设计。本论文完善了“生物质脉冲响应法”， 对其适用范围和精确度进行了系统考察，包括生物质脉冲浓度、脉冲量和床层膨 胀率等因素，确定了合适的测定条件：生物质脉冲的OD600值在o．5~o．6之间， 生物质脉冲量为床层沉降体积的80％，膨胀率为2．5。随后，确定了生物质穿透 指数(BTI)为指标，表征固体生物质颗粒在扩张床内的吸附状况。结果表明，“生 物质脉冲响应法”的稳定性好，数据偏差小，重复性好，BTI值可以量化表征固 体生物质颗粒与吸附介质间的相互作用。论文进一步把“生物质脉冲响应法”应 摘 要 用于典型的生物质，包括面包酵母、大肠杆菌、枯草杆菌和毕赤酵母细胞及其碎 DEAE和Streamline 片，考察了两种主要的阴离子交换扩张床介质Streamline QxL，充分证明了所建方法的可行性，积累了数据，发现了一些规律性现象。 鉴于静电引力是细胞或细胞碎片在扩张床介质表面吸附的主导因素，为了进 ～步揭示固体生物质颗粒／吸附剂问静电相互作用的微观本质，论文引入了胶体 化学的zeta电位概念，用于描述带电颗粒间的静电相互作用。考察了面包酵母、 大肠杆菌、枯草杆菌和毕赤酵母细胞及其碎片的zeta电位，测定了pH和离子浓 度对zeta电位的影响，发现zeta电位与生物质在扩张床介质表面吸附程度有一 定联系。论文以生物质穿透指数BTI表征生物质(细胞或细胞碎片)，扩张床吸 附剂间相互作用，以zeta电位描述微粒表面的电荷状况，在分析数据的基础上选 择合适的zeta电位参数(厶d，生物质zeta电位、吸附剂zeta电位和生物质平 均直径的乘积)，发现(．(矗d)参数和BTI呈良好的线性关系，BTI为0．9时对 应的(一。bd)参数值约120mV2岬。因此，可以通过zeta电位参数(一‘‘bd) 来预佶固体生物质颗粒／吸附剂间的静电相互作用，用简便的zeta电位测定来筛 选分离介质和分离条件，保证扩张床吸附过程的顺利实施。 在前面研究和前人工作的基础上，本论文从过程设计的角度出发，根据不同 方法各自的特点，合理安排离子选择性电极RTD分析、生物质脉冲响应法、zeta 电位评估和静态吸附实验等固体生物质颗粒影响的评价手段，同时结合了目标物 吸附条件的优化和扩张床工艺条件的选择，提出了整体的“兼颍目标物吸附和固 体生物质颗粒影响的扩张床吸附过程