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NO、OPG/RANKL 在大鼠运动性骨损伤发生过程中的表达及作用研究 中文摘要 中文摘要 研究目的： 过度训练或过度使用导致骨骼损伤易感性增加，进一步加剧的应力刺激能够 产生运动性骨损伤。运动性骨损伤是应力性骨折的一种，是困扰运动员和教练员 的一个棘手问题，然而有关运动性骨损伤发生的具体机制仍不清楚。本实验采用 大负荷跳跃运动方式建立运动性骨损伤大鼠模型，从传统骨代谢生化指标、一氧 化氮和OPG、RANKL 基因表达等方面入手，探讨运动性骨损伤发生的分子机制。 研究方法： 48 只2 月龄雄性SD 大鼠，随机平均分为对照组和跳跃组，每组24 只。跳跃 组大鼠置于自制跳跃电刺激笼内进行大负荷跳跃训练，对照组安静饲养，每两周 分别从两组中取8 只大鼠处死取材，6 周时结束实验。每次取材实验时心脏取血， 采用比色法检测骨代谢生化标志物血清碱性磷酸酶（AKP ）和抗酒石酸酸性磷酸 酶（StrACP ），采用化学法检测NO 和NOS 酶活性。大鼠一侧胫骨制作HE 石蜡切 片并染色观察，另一测取骨干端部分骨质使用磨骨钳碾磨后，提取 RNA ，应用 RT-PCR 法检测目的基因OPG、RANKLmRNA 的表达。 研究结果： （1）跳跃组AKP 活性第2 周和第4 周时活性均高于对照组（p0.05 ），而跳 跃 6 周后活性极显著高于对照组（p0.01 ）。与对照组相比，跳跃2 、6 周组大鼠 StrACP 极显著升高（p0.01 ），跳跃4 周组显著升高（p0.05 ），其中跳跃2 、4 周 组升高幅度基本一致，而跳跃6 周组升高幅度最大。 （2 ）跳跃2 周组NO 水平有升高趋势，但无统计学意义（p0.05 ），跳跃4 周 组NO 水平显著升高（p0.05 ），而跳跃6 周组NO 升高幅度最大，具有非常显著 性差异（p0.01 ），血清iNOS 在6 周时活性下降，未发现与NO 存在相关性。 （3 ）经过2 周跳跃刺激，与对照2 周组相比大鼠胫骨OPGmRNA 表达量轻微 下降（p0.05 ），而跳跃4 周时，OPGmRNA 表达回升与对照组无差异，而到6 周 时，OPGmRNA 表达明显升高（p0.01 ）。跳跃2 周、4 周组大鼠胫骨RANKLmRNA 表达有所增加，但无显著性差异，跳跃 6 周组 RANKL mRNA 表达量显著增加 （p0.01 ）。 I 中文摘要 NO、OPG/RANKL 在大鼠运动性骨损伤发生过程中的表达及作用研究 （4 ）跳跃组血清NO 水平与OPG mRNA 表达、RANKL mRNA 的表达和血 清AKP 活性存在相关性，相关系数分别是r=0.819 （p0.01 ）、0.864 （p0.01 ）和 0.536 （p0.05 ）；OPG 与 RANKLmRNA 表达量之间存在高度相关性（r=0.947 ， p0.01 ），OPG 与AKP 之间也存在相关性（r=0.615 ，p0.01 ）；RANKL 与AKP 之 间存在相关性（r=0.565 ，p0.01 ）。 研究结论： （1）NO 对应力刺激敏感，与骨形成生化指标AKP 浓度存在相关性，参与运 动性骨损伤骨质破坏过程。 （2 ）过度应力刺激导致OPG\RANKLmRNA 表达升高，是运动性骨损伤发生 分子机制之一。 （3 ）NO 与 OPG、RANKLmRNA 变化呈正相关，NO 是应力敏感信号通路 OPG\RANKL\RANK 的上游重要影响因子。 关键词：运动性骨损伤；一氧化氮；OPG ；RANKL 作 者：李盛村 指导教师：王国祥 II NO、OPG/RANKL 在大鼠运动性骨损伤发生过程中的表达及作用研究