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miRNA研究的新思路 GeneCopoeiaTM 4006 020 200 唐珍洁 GeneCopoeia公司介绍 • 日本Riken：2004年1月-4月，为Riken提供1600个人类基因克隆构建。 • Roche：2006年4月-2007年3月，合作完成13000个人类基因克隆的无细胞体系蛋白表达。 • NCBI ：2009年成为NCBI推荐克隆供应商。 • 中国科学院广州生物医药与健康研究院：2006年5月至今，慢病毒载体和哺乳动物载体干细胞相关 基因表达克隆构建，华南地区特种疾病相关胚胎干细胞库的建立。 • 上海生化所：2007年4月-2007年10月，300多个人类激酶组shRNA表达克隆构建与确证。 • 美国NIH （美国国家卫生研究院）：2007年7月-2008年1月，3000个斑马鱼克隆构建。 • 美国Novartis （美国诺华制药）：2009年10月，美国诺华制药签约长期基因克隆供应商。 提纲 • miRNA的研究最新进展 • miRNA的文献计量分析 • miRNA研究的思路 miRNA研究进展表达调节 miRNA研究进展功能探讨 miRNA研究进展作用的分子机理 • Dissection of Human MiRNA Regulatory Influence to Subpathway • /newsf/read.asp?page=2011715180409997 miRNA的文献计量分析 miRNA的文献计量分析词频分析 miRNA研究思路 表达谱分析 生物信息学分析 miRNA研究 miRNA表达调控 miRNA功能研究 miRNA作用机理 过表达试验 信号通路探讨 表观遗传学 抑制表达试验 靶标确证 miRNA的检测方法 Nothernblot Microarray Quantitative Real-time PCR 新一代测序 qPCR的方法 Loop反转录 Poly A 加尾法 法 每次RT只能检测1个miRNA 1次RT可检测所有miRNA 特异性高 通用性高； 多个样本中检测同一miRNA 适合miRNA的高通量检测 价格较高 经济、方便 miRNA qPCR 验证引物数据库 • 人、小鼠、大鼠miRNA的Q-PCR引物都通过严格的实验验证 • /product/search/index.php?prt=22 • 输入miRNA name、Acc No或Sequence等即可获得验证结果 miRNA qPCR Dectection kits Discrimination No. of mismatch: 0nt 1nt 2nt 2nt 红色的100%为引物和miRNA序列完全匹配的检测分