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牛膝多肽神经保护作用的实验研究 中文摘要 牛膝多肽神经保护作用的实验研究 中文摘要 目 的： 观察牛膝多肽“．bidentata 机制。 方法： (1)采用大脑中动脉线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，通过测定神经 功能缺陷评分、脑梗死百分比(TTC法)，在体观察牛膝多肽的神经保护作用。 (2)以体外原代培养胎鼠海马神经元为研究对象，建立N．甲基．D一天冬氨酸 经保护作用。 测等观察牛膝多肽对NMDA诱导的海马神经元调亡的影响。 (4)利用钙离子荧光探针Fluo一3／AM标记海马神经元，通过激光共聚焦显微镜 检测，观察牛膝多肽对NMDA引起的海马神经元胞内钙离子浓度的影响。 (5)通过Westernblot，观察牛膝多肽对NMDA引起的海马神经元Bax蛋白过 表达的影响。 Caspase．3蛋白活性增高的影响。 神经元，通过多功能酶标仪检测NMDA引起的海马神经元线粒体跨膜电位、活性氧 自由基含量的变化。同时观察牛膝多肽对NMDA引起的海马神经元线粒体跨膜电位、 活性氧自由基含量的影响。 (8)采用全细胞膜片钳技术，观察牛膝多肽对NMDA电流峰值、平台期电流值、 失敏系数的影响。 牛膝多肽神经保护作用的实验研究 中文摘要 天，通过MTT检测，观察两种不同的选择性抑制剂对NMDA诱导神经元损伤的影 响，同时观察牛膝多肽对NMDA诱导神经元损伤的影响。 (1 0)应用钙离子荧光探针Huo一3／AM标记通过激光共聚焦显微镜检测，观察含 离子浓度的影响。 流值、失敏系数的影响，并观察牛膝多肽对含NR2A、NR2B两种不同亚单位类型 NMDA受体介导的NMDA电流峰值、平台期电流值、失敏系数的影响。 结 果： ‘ (1)局灶性脑缺血再灌注损伤能引起大鼠死亡，死亡率达到50％，对存活的大 脉给予牛膝多肽(0．2mg／kg)治疗，可以降低神经功能缺陷评分，降低脑梗死百分比 (p0．01)。 (2)通过MTT检测结果显示，NMDA能降低培养的海马神经元的活力，而且 随着NMDA浓度的增加、作用时间的延长，神经元的活力逐渐下降。牛膝多肽能抑 制NMDA引起的海马神经元活力下降，并与其剂量相关。 ladder检 导的海马神经元调亡。 (4)钙实时成像结果显示，NMDA能引起海马神经元胞内钙荧光强度增加，并 预先、同时、后加入牛膝多肽都能减弱NMDA引起海马神经元胞内钙荧光强度增加， 并随着浓度增高，抑制程度增加。 lI 牛膝多肽神经保护作用的实验研究 中文摘要 元活力的降低。RT-PCR和Westernblot结果提示，海马神经元BaxmRNA及其蛋白 表达随着NMDA作用时间的变化而变化，其中作用30minBax蛋白表达明显增加 (p0．05)。牛膝多肽能拮抗NMDA损伤引起的海马神经元Bax蛋白表达增高。 (6)多功能酶标仪实时测定结果显示，分子探针DCFH．DA氧化后形成的荧光 产物DCF的荧光强度，随着NMDA浓度的增加而逐渐增高，而牛膝多肽能抑制 NMDA引起的荧光强度增强，并随着其浓度的增加，其抑制程度逐渐增强。 (7)多功能酶标仪实时测定线粒体跨膜电位，结果显示NMDA能引起线粒体跨 膜电位明显下降，而牛膝多肽能拮抗线粒体跨膜电位的下降。 活力下降(p0．05)，然而牛膝多肽不能抑制NMDA引起的急性细胞活力下降。体外 性细胞活力下降(po．01)。 起的海马神经元胞内钙荧光强度增加。当NVP．AAM007存在的时候，牛膝多肽能抑 制NMDA引起的海马神经元胞内钙荧光强度增加。当Ro一256981存在的时候，牛膝 存在的时候，牛膝多肽能抑制Bieueulline引起的海马神经元胞内钙荧光强度增加。当 度增加。