丙酮酸乙酯对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用与研究.pdf

博士论文 中文摘要 丙酮酸乙酯对肝脏缺血再灌注损伤保护作用的研究 第一部分 丙酮酸乙酯对肝脏L．02细胞缺氧／复氧损伤的保护机制研究 中文摘要 目的： 探索EP对肝脏L．02细胞缺氧／复氧损伤的保护作用和机制。 方法： 肝脏L．02细胞系根据干预措施分为三组，非干预组(Control组)、乳 氧装置，缺氧60Min，再复氧1hr：应用不同浓度的EP溶液进行干预，HO／PI 技术确定最佳实验浓度；细胞悬液AST和ALT；采用HO／PI技术双标记荧光染 色法观察各组细胞凋亡和坏死情况，并在荧光显微镜下计数；流式细胞仪观察各 组细胞凋亡和坏死情况；Western blot方法检测各组细胞悬液HMGBl的表达， 计算光密度值；Western 计算光密度值；透射电子显微镜观察细胞超微结构，线粒体结构；应用荧光素发 光法测量各组肝细胞内ATP浓度。 结果：观察缺氧／复氧肝细胞在EP浓度分别为1、2和5mmol／L情况下凋亡和坏 死情况，结果显示，2mMEP浓度下肝细胞坏死比例低于其它浓度组，尸值O．05。 检测细胞悬液AST和ALT，EP组分别为34．6±0．5IU／L和28．5±0．6IU／L，低于 组凋亡和坏死情况，结果显示，EP组活细胞比例高于另外两组，P值0．05；EP 组坏死细胞比例低于另外两组，尸值0．05；EP组凋亡细胞比例高于另外两组， 尸值0．05。采用流式细胞仪术检测缺氧／复氧肝细胞在各组凋亡和坏死，EP组坏 死细胞比例减少，凋亡细胞比例增加，与Control组、LR组相比差异有显著性， 尸值0．05。Westernblot方法检测HMGBl，EP组光密度值0．40士0．05，低于另外 0．254-0．02，和0．874-0．01，较另外两组表达明显，尸值0．05。通过电镜的检测， 发现各组受损肝细胞内线粒体均有不同程度的损害，胀大，甚至成空泡状。采用 荧光素发光法，检测各组肝细胞内的ATP浓度，Control组细胞内ATP浓度为 博士论文 中文摘要 浓度为3．476±0．5lLtmol／g，P值O．05。 结论： EP对肝脏L．02细胞缺氧／复氧损伤有保护作用；EP减少了肝脏L-02细 胞缺氧／复氧损伤的坏死细胞数量，凋亡细胞数量增加；EP提高细胞内ATP水平， 可能通过“凋亡／坏死共同通路’’激活凋亡过程，减少坏死细胞，进而降低内源 性损伤物质的表达，发挥了保护作用。 关键词：缺血再灌注损伤；坏死；凋亡；丙酮酸乙酯；高迁移率族蛋白．1 第二部分 丙酮酸乙酯对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护机制研究 中文摘要 目的： 探索EP对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用和机制。 ?方法：建立SD大鼠缺血再灌注损伤模型。分sham组、LR组和EP组三组。分 别在再灌注0，l，3，6小时，采血监测大鼠体内的AST和ALT浓度，确定IRI后损 伤高峰时相和EP的保护作用。通过HE／TUNEL技术从形态学角度判断缺血再灌 blot 注肝脏组织坏死细胞和凋亡细胞的情况，在高倍镜下进行计数。通过Western 荧光素发光法，检测了各组别肝组织内的ATP水平。 结果：监测大鼠体内的AST和剐Ⅱ浓度，LR组和EP组在再灌注后3小时后， IU／L和1436．4士15．2IU／L，舢．一T浓度分别为 AST浓度分别为2773．4士16．4 2356．3士15．4 IU／L和964士9．7IU／L，均高于其它时间点血样结果，尸值0．05，提示 再灌注后3小时，肝脏损伤最明显；同时再灌注后3小时，EP组AST和ALT 浓度低于LR组，尸值0．05。HE／TUNEL从形态学角度判断缺血再灌注肝脏组织 坏死细胞和凋亡细胞，LR组坏死细胞比例占45士0．4％，EP组坏死细胞比例