中药白头翁提取的新活性分子白头翁皂苷甲(BD)抗肿瘤作用研究.pdf

中药白头翁提取的新活性分子白头翁皂苷甲(BD)抗肿瘤作用的研究 中文摘要 中药白头翁提取的新活性分子白头翁皂苷甲(BD) 抗肿瘤作用的研究 中文摘要 原发性肝癌在中国的发病率～直居高不下，胰腺癌的发病率近些年也呈现迅猛 的上升趋势。而且肝癌和胰腺癌恶性程度高，生存期短。虽然近年来手术治疗进展很 大，但由于明确诊断时大多为中晚期，缺乏有效的治疗方法。所以综合治疗成为主要 的治疗手段，包括介入治疗、放射治疗、中医药、热疗等。中医中药治疗由于症状改 善显著，副反应小，全身状态保持较好，肿瘤亦可缩小或带瘤长期生存等优点使中医 中药在综合治疗中占有重要地位。 近年来，植物来源的药物得到越来越多的重视。通过从传统中草药中寻找新的独 特的化学结构，进而创制新的先导化合物的途径，大大提高了新药的发现率。 白头翁皂苷甲(BD)是我们从中草药白头翁提取的一种新的活性分子。本论文 将就该活性分子抗肿瘤效应及其作用机制进行研究。 药物的来源与制备 苏州大学药学院药物化学实验室首先从白头翁中分离获得纯白头翁皂苷甲粉剂， 命名为“BD”。制备步骤如下： 三次后，减压下干燥，得到的残余物(2．40千克)，将其溶解在蒸馏水中，然后通过 77：23(10升)，81：19(10升)，85：15(10 钟的流速，梯度洗脱。纯白头翁皂苷甲为85：15洗脱的馏分。HPLC分析PDA检测白 头翁皂苷甲的纯度为95．2％。命名为“BD”(结构图如下)。 中文摘要 中药白头翁提取的新活性分子白头翁皂苷甲(BD)抗肿瘤作用的研究 图白头翁皂苷甲(BD)结构 第一部分：白头翁皂苷甲(BD)在体外抑瘤作用的实验研究 目的 探讨BD分子体外对肿瘤细胞的生物学效应。方法提纯后的BD粉剂溶于 细胞，通过cck-8观测细胞的生长状况，流式细胞仪检测进行细胞周期分析，细胞染 色观察细胞形态，Annexin-V染色后流式细胞仪检测凋亡。结果生长曲线显示与对 照组相比，BD能明显抑制肝癌细胞株及胰腺癌细胞株细胞增殖(P0．05)；细胞周期 果显示BD处理后凋亡明显增加，并且随着药物浓度的增加，凋亡细胞的比例亦增加。 结论BD分子体外具有抑瘤效应。其抑瘤效应主要通过使肿瘤细胞周期阻滞，促进 肿瘤细胞凋亡，从而抑制肿瘤细胞的增殖。 第二部分：白头翁皂苷甲(BD)在体内抑瘤作用的实验研究 前期实验，我们已经证实，BD在体外能抑制肿瘤细胞(肝癌、胰腺癌)的增殖。 进一步研究发现，其影响增殖主要是使肿瘤细胞阻滞在G2期，并促进肿瘤细胞凋亡。 但是中药的作用机制是复杂的，药物进入体内后，将受到体内各种因素的影响。 目的探讨BD分子裸鼠体内的抗肿瘤作用。方法裸鼠移植瘤成瘤至一定体积 后，通过腹腔注射或灌胃BD，观察移植瘤生长曲线、抑瘤率、体重、脏器指数等指 Ⅱ 中药白头翁提取的新活性分子白头翁皂苷甲(BD)抗肿瘤作用的研究 中文摘要 标。CTX为阳性对照。结果与对照组比较，BD组裸鼠体重变化不明显(PO．05)； 与对照组比，CTX组、BD组瘤重显著降低(P0．05)，不管是腹腔注射还是灌胃组； 与CTX组相似，BD组在给药12天后，裸鼠移植瘤生长明显慢于对照组，实验结束 移植瘤现大面积坏死、变性，同时纤维组织大量增生，与对照组明显不同。结论在 裸鼠体内，与CTX相似，BD能很好抑制移植瘤的生长，即BD亦具有很好的抗瘤作 用。 第三部分：白头翁皂苷甲(BD)抑瘤作用机制的研究 前面几部分的实验已证实，BD在体外能通过细胞周期阻滞，促进凋亡，从而抑 制肝癌和胰腺癌细胞株的生长。体内实验亦证实，不管是通过腹腔注射还是直接灌胃， BD均能抑制裸鼠移植瘤的生长。 目的探讨BD分子抗肿瘤作用的分子机制。方法通过分子生物学方法，明确 BD分子作用通路，单分子凝胶电泳探究BD作用的机制。结果BD处理后，肿瘤细 B的表达明显增加，并且具有 胞内BCL2表达明显减低，并且具有剂量效应。Cyclin 剂量效应。同时药物处理组p53表达成剂量效应的增