低氧、运动大鼠骨骼肌蛋白代谢及肌球蛋白重链（MHC）亚型基因表达的影响.pdfVIP

摘 要 低氧 运动对大鼠骨骼肌蛋白分解代谢及肌球蛋白 重链 MHC 亚型基因表达的影响 本文旨在研究低氧 运动对大鼠骨骼肌蛋白分解代谢 横桥性能及肌球蛋白重链 MHC 亚型基因表达的影响 1实验方法 1 1 急性实验方法 取健康 SD 雌性大鼠 152 只 随机分成四大组 1 常氧对照组 C 2 常氧力竭组 NE 3 低氧对照组 HC 4 低氧力竭组 HE 其中HC HE 两个低氧组在模拟4000 米高原的低氧舱 氧浓度 12. 7% 进行低氧暴露及力竭后的低 氧恢复 3 天后NE HE 两个运动组均在常氧下进行一次力竭性跑台下坡运动 跑速16 米 /分 0 坡度 16 各组均于力竭后即刻 12h 1d 2d 4d 7d 用戊巴比妥钠腹腔麻醉 宰 杀 迅速选取股四头肌样本液氮保存 1 2慢性实验方法 取健康SD雄性大鼠32只 随机分成4组 1慢性对照组 Cm 2 常氧训练组 NT 3 低氧安静组 HC 4 低氧训练组 HT 其中HCHT两个 低氧组每天保证22小时生活在模拟4000米高原的低氧舱 氧浓度12.7%经2天跑台适 0 应后 NTHT两个训练组每天进行跑台上坡训练1小时 跑速定为20米/分 坡度 10 28天后 各组均于安静状态下麻醉 宰杀 迅速选取股四头肌样本液氮保存 1 3测定指标 用紫外分光光度法测定骨骼肌组织蛋白酶D活性 游离 比色法测定 肌原纤维ATPase活性 采用半定量反转录聚合酶链式反应 RT-PCR法 测定骨骼肌MHC a x b四种亚型的mRNA基因表达 采用SDS分析骨骼肌MHC含量及MHC亚型 百分组成的变化 并用免疫印记Western Blot方法 观察 验证MHC电泳条带 2结果与分析 2 1急性实验结果 在力竭后及恢复期间 与对照组 C 相比 低氧安静组 HC 低氧力竭组 HE组织 蛋白酶D有明显升高 P0.05P0.01其中HE组升高幅度更大 而常氧力竭组 NE 变化不显著 HE和HCNE相比差异亦显著 P0.01表明低氧和运动两种因素共同作用 对骨骼肌溶酶体组织蛋白酶D的影响更大 与常氧对照组 C 相比 低氧对照组(HC)在低氧数天后 股四头肌肌原纤维 ATPase 活性明显升高 P0.01 常氧力竭组 NE 力竭后24h 才出现升高 而低氧力竭组 HE 则无显著变化 说明单纯低氧或常氧运动可引起肌原纤维ATPase 活性升高 但两种因素并 不是简单叠加 力竭后低氧恢复对肌纤维收缩活性不利 本实验SDS电泳图谱上Marker所指的MHC及其亚型条带已通过免疫印迹方法得 到证实 从 MHC 蛋白水平电泳结果来看 与对照组 C 相比 低氧力竭组 HE MHC 快 a+x百分比显著降低 (P0.01)快 b则升高 即有 由慢到快 趋势 低氧安静组 HC 亦有 由慢到快 趋势 而常氧力竭组 NE 则有 由快到慢 趋势 但统计差异 不显著(P0.05) 从基因表达水平观察 与常氧对照组 C 相比 低氧对照组 HC 总MHC 及各亚型 mRNA 表达量均显著升高 P0.05各时间点无明显区别 其它组几种亚型mRNA 表达 量虽有差异 但低氧或力竭后各组总体上表现为上升趋势 MHC 各亚型 mRNA 所占百分 比分析显示 单纯低氧能刺激MHC 亚型 mRNA 表达出现 由慢到快 的趋势 另一方面 I 力竭运动能刺激MHC mRNA 表达出现 由快到慢 的趋势 与上述蛋白水平基本一致 2 2慢性实验结果 慢性实验 28天后 与常氧对照组 Cm相比 低氧对照组 HC 低氧训练组 HT 和