microRNA-183家族在噪声性耳聋发生及其发展中的表达及其功能的研究.pdfVIP

摘要 摘 要 噪声引起的慢性听力损失与耳蜗内的机械损伤和代谢障碍密切相关。人们 如果持续在有害的噪声环境中工作或生活，由于噪声长时间的过度刺激很可能 会导致耳蜗毛细胞坏死或者凋亡，耳蜗毛细胞内的氧自由基活动增强和能量代 谢障碍被认为是导致内耳毛细胞坏死或者凋亡的主要原因。随着噪声性聋发病 机制研究的深入，研究人员发现噪声性耳聋是环境和基因两个因素共同影响的。 miRNA在生物体发展过程中的作用已被广泛的研究，许多高保守性的 miRNA在特定的细胞、器官和生物过程(包括疾病)中的作用也得到了充分的 认识。其中miR．183家族在内耳中具有丰量的表达，并在内耳发育中具有重要 的调控作用，而且miR．183家族与听力损失也有密切的关系。因此，miR．183家 族与听力损失之间相关性的研究将成为热门。进而探索在基因水平上的治疗，特 别是有关促使毛细胞再生领域及听力提高等方面。由此可见，miR．183家族在听 力学领域有着不可估量的科学价值，同时也为人类的听力开辟一条新的光明之 路。 本课题通过噪声频率为中心频率2000～4000Hz的窄带噪声，给声强度为 100dB SPL，每天连续6小时，持续噪声暴露3天来建立小鼠的噪声性耳聋 (noise．induced loss，NIHL)的动物模型，探讨噪声性耳聋对内耳毛细胞 heating (hair cell，HC)的破坏程度，及检测噪声性耳聋前后耳蜗内miR．183家族成员 的表达变化，为进一步阐明噪声性耳聋的发病机制打下基础，也为将来治疗噪 声性耳聋提供一条新的思路。本文共分为三个部分。 第一部分噪声性耳聋模型的建立 目的：建立噪声性耳聋动物模型，为研究噪声性耳聋对内耳毛细胞的破坏 程度，及检测噪声性耳聋前后耳蜗l为miR．183家族成员的表达变化奠定基础。 验组给予中心频率2000～4000Hz的窄带噪声，强度为lOOdBSPL，每天6小时，持 续3天。对照组不接触噪声。在噪声刺激前及噪声刺激后1、7、14和28d后．测ABR 阈值。 摘要 结果： 以能分辨出I或II波波型的最低刺激强度来确定ABR阈值，并重复2 dB、44．50+4．56 次。噪声暴露后ld、7d、14d、28d组ABR平均阈值分别为62．50+3．80 dB、40．25+4．13dB、40．50+3．20 dB。统计分析示，实验组噪声刺激前后ABR阈 值均有显著性差异(PO．01)。噪声刺激后，对照组与实验组每组之间差异有统计 义(P0．05)。 结论： 此噪声刺激可以引起小鼠听力的永久性阈移，证实基本成功地建立 了噪声性听力损害的动物模型，为噪声性耳聋发病机制的研究打下了基础。 第二部分噪声性耳聋内耳毛细胞的研究 目的： 检测噪声性耳聋后内耳毛细胞的破坏情况，为判定噪声通过损伤毛 细胞来破坏听力提供依据。 方法： 各组小鼠在麻醉后迅速断头处死，取其双侧听泡。用0．5％硝酸银溶 液染色，再取其耳蜗基底膜进行铺片，用纯甘油封片，在倒置相差显微镜下观 察并摄片，观察毛细胞破坏情况。 结果：正常对照组小鼠耳蜗第二回基底膜可见三排外毛细胞(红箭头)和 一排内毛细胞(蓝箭头)均排列整齐，同时染色缺失率极小。清晰可见其外纤 毛簇呈倒“v”形，内纤毛簇呈宽“u”形；1d组内毛细胞排列比较整齐，外毛细胞排 列稍显混乱，且大小不一，但总体缺失仍较少；7d组内毛细胞依然排列比较整 齐，但外毛细胞可见少量缺失；14d组外毛细胞可见有明显缺失，主要集中在第 一、二排；28d组内毛细胞排列较整齐，未见有缺失，外毛细胞见大量缺失。 结论： 此程度噪声可以引起内耳毛细胞破坏，同时毛细胞的受损可能是小 鼠噪声性耳聋的早期病理性改变，而且这个过程至少可以延续N28天。破坏主 要在外毛细胞，且多集中在第一、二排。 第三部分miR．183家族在噪声性耳聋中的表达及研究 目的： 检测噪声性耳聋前后耳蜗内miR