BuforinⅡ抗菌肽的分子设计及对DNA作用抑菌机理及研究.pdfVIP

摘要 摘要 抗菌肽的研究有几十年的历史，而各国学者研究抑菌机理主要集中在膜作用机制 上。有些抗菌肽并不破坏膜结构，而是直接穿过胞膜，作用于胞内靶点，这可能就是其 胞内分子作用抑菌机制。分离自蟾蜍胃组织中的抗茵肽BuforinII能穿透细胞膜，直接 作用于胞内DNA。不同于作用膜的抗菌肽，DNA作用抗菌肽有其独特的抑菌机制，但 它的具体抑菌模式仍不清楚，值得我们去深入研究。 列RLLR，并将第8位上的缬氨酸用亮氨酸取代。经生物信息学软件分析，两个阳离子 肽都没有跨膜区，与BF2一A相比，BF2．X的螺旋度与正电荷增加，疏水性比例提高， C一端两亲性增强。当置于疏水环境中时，BF2．A／X会由自由卷曲结构诱导成仅．螺旋结构， 且BF2一X的0【一螺旋含量高于BF2．A。它们对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等细菌以及白 色念珠菌等真菌有广谱的抗菌活性，BF2．X对细菌的抗菌活性强于BF2一A，其对大肠杆 增强BF2．X的抗菌活性，而BF2．A不是浓度依赖性的抗菌肽。两个抗菌肽没有体外溶 血活性，也没有细胞毒性，能结合脂多糖中和内毒素，对热稳定，最适pH为中性。BF2．A／X 对胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶具有抵抗力，但不能抵抗蛋白酶K的酶解，也不耐 受高离子强度溶液。 BF2．X引起脂质体包裹的荧光染料的泄漏是浓度依赖性的，其泄漏率比BF2．A高， 但它们都不能使脂质体膜破裂。BF2．A能增加G。菌外膜的渗透性但不能增加细菌质膜的 通透性，BF2．A能引起钾离子泄漏，但它处理后的细菌胞膜保持完整。BF2．X能增加细 菌外膜、质膜渗透性，5MIC时还能诱导胞内大分子的轻微泄漏。BF2．X对细菌胞膜的 通透作用比BF2．A大，引起钾离子泄漏量略多于BF2．A，但它并不崩塌细胞膜。由于 提高了C一端的螺旋度和疏水性，无论对G‘菌还是G+菌，BF2．X穿透细胞质膜的效率都 要比BF2．A高。 吸引结合到DNA上，能够插入到DNA双螺旋的沟槽中使双螺旋结构变得松散，还能 杆菌基因组DNA上的两个区段进行特异性结合，其中一个区段是23SrRNA基因上的 ～段保守序列。 的能力都比BF2．A强。两个抗菌肽还能优先抑制蛋白的合成，BF2．A抑制蛋白合成的 摘要 能力则比BF2．X强。抗菌肽还能影响细胞的氧化磷酸化过程，显著抑制细菌的呼吸作用 的方式，进一步影响蛋白和核酸的生物合成。 本文研究比较了BF2．A／X的抗菌机理以及构效关系，发现它们不破裂细胞膜，而是 菌肽，由于提高了其C．端的疏水性比例与螺旋度，它增加了质膜的渗透性，使其穿透细 胞膜的效率较高，结合DNA的能力更强，抑制DNA和RNA合成的能力也更强，这就 是它抗菌活性比BF2．A强，杀菌迅速的原因。本文的研究结果将为我们更好地了解和利 用这类DNA作用抗菌肽奠定坚实的基础。 关键词：抗菌肽；BuforinII；衍生物；抑菌机理；DNA；细胞膜 Ⅱ Abstract Abstract nle of bactericidalmechanismsof study antimicrobialwas atthe peptidesalwaysaiming membrane actionmechanismalmost researchersseveral by during decades．Therewereafew whichmolecularaction peptides mechanisminvolvedin cell the membranewithout