毛细管电泳中tMCRB法富集、分离两性电解质研究.pdfVIP

毛细管电泳中 tMCRB 法富集、分离两性电解质的研究 摘 要 移动化学反应界面（Moving Chemical Reaction Boundary，MCRB） 理论是在前人研究的“沉淀反应前缘”基础上提出来的，相关的理论（包 括移动化学反应界面方程（MCRBE））已得到众多实验的验证和修正。作为 一种新的样品在线富集方法，MCRB已成功地在甲酸体系中对毛细管电泳中 的氨基酸实现了在线盐样富集。本论文在此基础上开展了理论和实验研 究，主要包括以下几个部分。 1．具体介绍移动化学反应界面理论的内容，包括强反应电解质或弱 反应电解质形成的界面系统的理论界面速度的计算公式；在此基础上，发 展了在毛细管电泳中富集两性电解质的理论、方法学，包括两性电解质富 集的机理。 2．应用阳离子表面活性剂（CTAB）修饰毛细管壁，考察了CTAB浓度 和电渗流（EOF）的关系。实验结果表明，CTAB对电渗流的影响很明显， 随着其浓度的增加电渗流逐渐降低，当浓度达到5×10-4%时，电渗流已经 发生的反向。 3．应用tMCRB在毛细管电泳中可以实现小体积两性电解质（实验中使 用组氨酸和色氨酸）的富集。该章进一步讨论了电压、样品电解质浓度、 上样时间、盐浓度及表面活性剂（CTAB）对移动化学反应界面法的影响。 结果显示上述因素对移动化学反应界面法都有一定的影响，尤其样品电解 质的浓度和表面活性剂。本部分实验进一步证明了MCRB法在富集两性电解 I 质中的有效性。 4．根据移动化学反应界面理论，从理论上预测了L-His和L-Trp在30 mM pH 3.0 甲酸(+,α)|| 2-80 mM甲酸钠(-,β)界面系统中的富集条件，应 用该方法富集大体积样品并讨论了CTAB在富集中的作用。结果表明：实验 结果与理论预测是完全一致的，进一步验证了该方法的有效性。另外，界 面系统中添加CTAB后，明显提高了大体积两性电解质的富集效果，而且实 现了对样品的选择性富集。 5．对预实验中的样品浓度进行10倍梯度稀释，考察富集效果。结果 应用该方法，可将整管的L-His和L-Trp压缩分离成两个尖峰，其富集倍数 6 6 分别提高到5.5×10 和3.4×10 倍，物理半峰宽分别为0.5 mm和1.2 mm以 6 6 下，理论塔板数分别为4.1×10 和4.65×10 。该方法提高毛细管电泳的选 择性和富集效率，极大地提高了毛细管电泳的检测灵敏度。 本实验进一步证明，移动化学反应界面法是一种有效的样品在线高效 富集法。因此，该方法在生命科学、医学和环境科学等领域具有很高的应 用价值。 关键词：毛细管电泳,移动化学反应界面理论,富集, 检测灵敏度，两性电 解质 II Quantitative Investigations on Stacking andSeparation of Zwitterions by TransientMovingChemicalReaction Boundary(tMCRB) in Capillary Electrophoresis ABSTRACT The theory of moving chemical reaction boundary (MCRB) was developed from the pioneer idea of “precipitate reactive front ” and the concept of “stationary neutralization reaction boundary” by Cao et al.