EGCG经Notch1-Jagged1途径抑制鼻咽癌干细胞SP18的增殖.pdf

目 录 中文摘要…………………………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………………………3 英文缩写注解……………………………………………………………………………5 前言………………………………………… ………………………………………6 技术路线…………………………………………………………………………………9 材料…………………………………………………………………………………10 方法…………………………………………………………………………………12 结果…………………………………………………………………………………17 讨论…………………………………………………………………………………3 1 结论…………………………………………………………………………………35 参考文献…………………………………………………………………………………36 综述…………………………………………………………………………… …4 1 攻读硕士学位期间的研究成果…………………………………………………………50 致谢…………………………………………………………………………………51 万方数据 EGCG 经Notch1-Jagged1 途径抑制鼻咽癌干细胞SP18 的增殖 硕士研究生：陈 波 导 师：罗招阳 教授 中 文 摘 要 目的：鼻咽癌是东南亚及我国南方地区（如广东、湖南、广西和香港等）常见的 恶性肿瘤之一。鼻咽癌干细胞在鼻咽癌的发生、发展、转移、耐药及对放化疗的 敏感性等方面起十分重要的作用。本研究旨在初步分析表没食子儿茶素没食子酸 酯（EGCG ）在体外抑制鼻咽癌干细胞SP18 增殖的机制。 方法：首先采用MTT 法检测EGCG 体外抑制鼻咽癌干细胞SP18 增殖的半抑制 浓度 （IC50 ）；其次选用细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验及平皿克隆形成实 验分析不同浓度EGCG （50.0 mg·L-1, 100.0mg·L-1, 150.0mg·L-1 和200.0 mg·L-1) ） 对鼻咽癌干细胞SP18 增殖的影响；再次利用流式细胞术 （FCM ）检测不同浓度 EGCG （50.0 mg·L-1, 100.0mg·L-1, 150.0mg·L-1 和200.0 mg·L-1) ）对鼻咽癌干细胞 SP18 周期与凋亡的影响；然后采用RT-PCR 和Western-blot 检测不同浓度EGCG （50.0 mg·L-1, 100.0mg·L-1, 150.0mg·L-1 和 200.0 mg·L-1) ）处理 SP18 细胞后 Notch 1 基因及蛋白的表达，最后运用 Western-blot 检测不同浓度 EGCG （50.0 mg·L-1, 100.0mg·L-1, 150.0mg·L-1 和200.0 mg·L-1) ）处理SP18 细胞后Jagged1 蛋 白表达。 结果：1、EGCG 体外抑制抑制鼻咽癌干细胞 SP18 生长增殖的IC50 值为 149.02 mg·L-1 ；2 、细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验及平皿克隆形成实验均显示， 随着EGCG 浓度不断升高和处理时间延长，对鼻咽癌干细胞SP18 增殖的抑制作 用逐渐增加 （n=3 ，P0.05 ）。3、流式细胞术 （FCM ）结果显示，随着EGCG 处 理浓度的升高，鼻咽癌干细胞SP18 中G1 期细胞比例明显增加，而S 期细胞比 例减少，细胞的增殖指数降低，且细胞凋亡率升高 （n=3 ，P0.05 ）。4 、RT-PCR 与 Western-blot 结果显示，鼻咽癌干细胞 SP1