Bac-to-Bac杆状病毒昆虫表达系统介导重组腺相关病毒的制备.pdfVIP

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2015-10-05 发布于江苏
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Bac-to-Bac杆状病毒昆虫表达系统介导重组腺相关病毒的制备.pdf

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衣壳蛋白和复制蛋白这两个基因表达片段经PCR反应连接到相应的限制性内切酶位点， AAV HindlIl和BamHI位点，经DNA测序正确后命名为pBclCap／Rep。此后将顺式载具有良好的生物学活性。结论：该系统克服了常规rAAV制备的限制性冈素，为临床级基因治疗用病毒的制备提供了实验依据，为rAAV的基因治疗打下了良好的基础。关键词：杆状病毒昆虫表达系统，sf9细胞，腺相关病毒，293T细胞 n ABSTRACT an andsafemethodfor ofrecombinantadeno。associated makeefficient production Objective：To insect clinicalscalebacuiovirus system． virus(rAAV)ofby expression terminal flameofrecombinant Methods：Inverted repeat(ITR)andtargetgeneexpression restrictionendonucleasePciIand adeno—associated were Sfol， virus(rAAV)vectordigestedby pAAV-MCS of were extractionthen the kit，and 2053bptargetfragments．Thetargetfragmentspurifiedbygel getting theendofthem Klenow．Bacuiovirusvector was restriction plained using pFastBacDualdigestedby and the of after theendof endonuclease Kpnl HindlII，getting4806bptargetfragmentspurification，then T4 SolutionI i were themwerebluntedwithKlenowand Polymerase．Usingigase，twofragments the of vector．Itwasconfirmeddouble Ndeland connectedas by enzyme Hpal together6859bpcis—acting and EcoRI DNA wasnamedas enzyme digestion．Aftersequenceanalysis，it pBcl digestionsingle AAV-MCS．Inordertotestthe ofr