PICK1及其结构域的表达，纯化和部分功能.pdf

中文摘要 形式表达，只有pM．bar在E,coli Xa蛋白水解酶的位点替换 切效果不理想，我们将pMAL-p2X载体中编码识别Factor 12分子 结构域，经SDS．PAGE分析，其纯度达95％左右。利用Pre-paekedSepharose 排阻层拆BARc洗脱的保留体积处于空体积(、bid 聚物。以牛脑的脂类提取物作为基质，利用蛋白质一脂类覆盖法(Protein LipidOverlay 性结合。同时CD谱也揭示随着脂类加入会引起BARc蛋白的a螺旋含量的增加，也 证实BAR(：结构域是和脂类的结合作用区域。BARc中包含有酸性氨基酸区域，因此 通过和BARc蛋白c端侧的酸性氨基酸的结合，导致BARc和脂类的结合能力增强。 蛋白主要是不溶性形式包涵体，经2mol／L脲素洗涤，和8mol／L脲素溶解，变性蛋 进行相互作用研究。SDS．PAGE分析表明，两者确实存在蛋白一蛋白相互作用。为 差来源导致两种蛋白结合量偏低，但这一实验进一步证明PDZ结构域与BAR结构 XII 中文摘要 互作用。 区域之间的相互作用，以FITC标记的多肽链GIuR2的C末端多肽片段作为配体， 进行荧光实验，测定了它们的结合常数。它们与GluR2C的结合比均为1：l， 7 M。1，PDZ．GluR2C的结合常数 PICKl．GIuR2C的结合常数为K椰CKI-GIuR20=1．0x10 为K(PDz舶R2c)=3，0x106 的相互作用。本实验结果表明，PICKl蛋白与GluR2C之间存在相互作用主要位于 PDZ结构域，而完整的PICKl结构域可能会增强它们间的相互作用。尽管实验证实 作用，相比较而言，还能促进这种相互作用。 关键词 蛋白激酶Cct相互作用蛋白(PICKI)；BAR结构域；PDZ结构域； 基因克隆与表达；生化性质 ABSTRA(叮 ABSTRACT withCctkinasea kinase PICKl(proteininteracting 1)is protein C(PKC) identified a-bindingproteinfirstly byusingyeast system．PICKl two-hybrid of416amino is acid Discs composed residues，involvingPDZ(PSD一95 large at and N-terminusaswellas Z01)domain themostofthecentral andanacidicaminoacid ranking part region domain closeto C-terminus．ThePDZdomainis asthemain