利奈唑胺和万古霉素对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌防耐药变异浓度与研究.pdf

中文摘要 利奈唑胺和万古霉素对临床分离的耐甲氧西林 金黄色葡萄球菌防耐药变异浓度的研究 摘 要 目的：检测利奈唑胺和万古霉素对临床分离金黄色葡 萄球菌的抗菌活性及两种药物对临床分离耐甲氧西林金黄 色葡萄球菌(MRSA)耐药突变株的选择能力，并比较其防 耐药突变的能力；在分子水平上初步探讨万古霉素耐药突变 株药物敏感性下降的可能机制。 方法：严格按照临床和实验室标准研究院(CLSI)推荐的 琼脂平板二倍稀释法测定利奈唑胺和万古霉素对105株金黄 色葡萄球菌临床分离株(其中MRSA85株)的最低抑菌浓度 (MIC)。质控菌株跟随每批试验，以确保整个试验的准确性； 肉汤富集法使细菌浓度达到1010CFU／ml，平板稀释法测定利 奈唑胺和万古霉素对56株临床分离MRSA的防耐药变异浓 p 度(MPC)。分别取100l菌液均匀涂布在含有抗菌药物的 MH平板上，每个浓度4个平板，使每个药物浓度的细菌接 生长情况，以72小时没有菌落生长的最低药物浓度为MPC。 术比对万古霉素防耐药变异浓度测定过程中筛选出的耐药 突变株，与其原始菌株在基因上的差异；对基因分型有差异 的菌株通过聚合酶链(PCR)反应，扩增graS基因；利用变 性梯度凝胶电泳技术(DGGE)检测在该基因上是否存在突 变。 中文摘要 结果：1利奈唑胺和万古霉素对105株金黄色葡萄球菌 la la 1la MIC 的MIC90均为2g／ml：MIC50分别为2 g／ml矛l g／ml la 范围分别为1--4 g／ml矛10．5～4u∥ml。我们试验结果中万古 la 霉素的MIC90较大，达到2g／ml，这是新修订CLSI标准万古 霉素敏感的界值，且有2株菌的MIC达到了4 p∥ml。2利奈 u la g／ml署120．5 MRSA检测结果显示万古霉素和利奈唑胺MPC均小于血药 峰浓度Cmax，血药浓度落在突变选择窗之上。利奈唑胺的选 黄色葡萄球菌菌的突变选择窗较万古霉素的窄。356株受试 菌经万古霉素ⅧC测定后耐药突变株，重新进行了MIC的测 定，筛选出的耐药突变株的MIC50为2u∥ml、MIC90为4 u∥ml。4 选出的部分耐药突变株与其原始菌株在基因分型上存在差 变点，电泳图上未发现电泳条带位置的区别。 结论：1利奈唑胺和万古霉素对石家庄地区临床分离金 黄色葡萄球菌的抗菌活性均较好，尚未发现耐万古霉素和利 奈唑胺的金黄色葡萄球菌菌株。但我们的结果提示万古霉素 的抗菌活性在下降，应引起高度重视。2利奈唑胺和万古霉 素作用于MRSA均不容易筛选出耐药突变株。利奈唑胺限制 临床分离MRSA耐药突变菌株的选择能力强于万古霉素，利 奈唑胺较万古霉素更不容易筛选出耐药突变株。其机制是否 与临床应用时间短或其特有的作用机理有关，尚待进一步研 究。3万古霉素MPC测定试验筛选出的耐药突变株，较原 中文摘要 始菌株对万古霉素的耐药性增加。4在临床经过万古霉素长 期作用后可能会因这些突变菌的富集从而造成临床感染菌 株部分基因的变化。5通过DGGE检测未发现graS基因突变。 提示可能存在有其它基因位点的突变，或另外的耐药机制。 关键词：金黄色葡萄球菌；利奈唑胺；万古霉素； 防耐 药变异浓度； 抗菌活性；基因突变；耐药 英文摘要 on Researchthemutant prevention oflinezolid and