拟南芥CDF家族基因AtMTP6的功能及研究.pdfVIP

摘 要 CDF蛋白家族是最近发现的一个阳离子转运蛋白家族，在维持金 属动态平衡和耐受方面起很重要的作用。拟南芥基因组测序完成后， 序列分析表明拟南芥cDF家族至少由12个成员构成，命名为 爿埘即卜蜴本研究克隆彳删7阳并初步鉴定其功能。彳删7阳位于第 二条染色体上，编码一个含有47laa的蛋白质，结构分析表明其具有 cDF家族的一些共同特征，如c端有一个cE功能域、N端有一段信号 序列，但与已鉴定的成员不同的是它只含有五个跨膜区。本研究包括 克隆、鉴定生化及生理功能、描述亚细胞定位，并取得了以下结果： 1．通过RT—PcR克隆爿删7m测序结果显示其序列与AGI预测 的序列完全一致。将彳埘7阳基因的cDNA构建至原核表达载体 pTrc99A，重组载体转化大肠杆菌突变株KAM3，平板上的结果表明， 此基因的表达使细菌对Zn”、EtBr更加敏感。 2．通过与绿色荧光蛋白(GFP)融合，在共聚焦显微镜下显示此 蛋白定位于细胞器上，此结果与在线软件PsORT的预测结果比较一 致，且预测AtMTP6很有可能定位于线粒体膜上。 3．为了研究爿洲7阳的生理功能，过表达彳￡彤7阳的转基因拟南 芥、互补转基因拟南芥、纯合T—DNA敲除突变体和野生型四种材料同 时在正常或胁迫的平板上进行表型观察，结果显示：过表达植株对 引起线粒体内EtBr的积累从而对细胞造成损害；四种材料生长于含 不同浓度zn2+的平板上时没发现什么表型；过表达植物的种子种皮颜 色较浅且尺寸较小，可见AtMTP6可能与色素转运有关；在含有甘露 醇的高渗平板上，过表达植物种子的萌发很明显被抑制，可见AtMTP6 与渗透胁迫有关；在正常生长条件下，过表达植物开花要明显早于其 它三个材料，表明AtMTP6可能参与调控或确定植物的开花时间。 关键词：AtMTP6，CDF家族，拟南芥，突变体 ABSTRACT Cationdiffusion arearecently facilitator(CDF)proteins Llx that discoveredofcationeffl play family transportersmight tasisandtolerance．After anessentialr01einmetalhomeos nolessthan12 ofCDF Arabidopsissequencing， genes genomic andnamed彳￡∥7)吖一』2This cloned familyareidentified study 爿硝7阳 characterizedthefunction． 爿南Ⅳ7)D疗andprimarily locatesonthesecondchromosonIe a471aa encoding protein+ revealsthis hasthe CDF Structural general analysis protein domainand