细胞外信号调节激酶1%2f2与诱骗受体3在胃癌BGC823细胞中相关性及研究.pdf

摘要 摘要 胃癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤。诸多文献中均有报道：ERK／MAPK 信号传导途径能够促进胃肠道肿瘤细胞的增殖，异常活化能够导致细胞丧失凋亡 和分化的能力，促使细胞恶性转化。肿瘤细胞可通过异常表达Fas或使Fas功 能失常而逃逸FasL诱导肿瘤细胞凋亡；同时，肿瘤细胞大量表达DcR3来竞 争结合FasL逃避机体的免疫监视。肿瘤的快速增殖、丧失凋亡、ERK的异常 活化、DcR3的大量表达，四者之间在时间上具有一致性。前期研究通过检测胃 癌患者肿瘤标本、裸鼠模型的胃癌组织及各器官中DcR3与ERKl／2表达情况， 得出以下结论：DcR3与ERKl／2在胃癌患者肿瘤标本及裸鼠模型器官组织中的 表达量增高，并有一定的协同表达。并且DcR3与ERKl／2的表达情况与胃癌 的分期及转移情况密切相关，晚期胃癌二者表达更为显著，两种信号因子与胃癌 的发生发展可能有着密切联系。为了更进一步阐明两者关系，本实验以胃癌 BGC823细胞为研究对象，通过构建ERKl／2shRNA真核表达载体，应用特异 对人胃癌细胞株BGC823 ERKl／2蛋白及DcR3分泌及FasL活性的影响。 合成针对人胃癌细胞株BGC823ERKl／2基因的RNA干扰靶序列，将其 体法导入BGC823细胞中，干扰ERKl／2的表达。应用特异性抑制剂U0126、 PD98059、APDC抑制通路中相关分子的表达。Westernblot法检测转染后 BGC823细胞及抑制剂使用后ERKl／2蛋白的表达变化，荧光显微镜检测质粒 自带GFP基因的表达情况确认转染效率，ELISA法检测各组细胞上清中DcR3 分泌蛋白的表达特点。并利用本室制备的FasL，通过流式细胞术检测ERK信 号通路的变化对FasL作用的影响。 误，转染干扰质粒至人肾上皮细胞系293T细胞，同时设空白对照。镜下可见大 量荧光蛋白表达，转染效率高，并筛选出有效干扰序列。Western．blot结果证实 有效干扰序列能显著抑制细胞内ERKl／2蛋白的表达。干扰BGC823细胞后， 摘要 收集各组细胞上清检测DcR3分泌水平，ELISA结果显示：DcR3表达在各干 扰组中有不同程度下降；应用特异性抑制剂改变BGC823细胞ERK通路中相 效抑制ERKl／2表达，收集各组细胞上清检测DcR3分泌水平，ELISA结果显 示：DcR3表达在各组中有不同程度下降；应用FasL作用于ERKl／2表达改变 组，流式细胞术结果显示：BGC823细胞早期凋亡、晚期凋亡率明显上升，FasL 活性提高。 Western．blot证实可以有效且特异地下调目的基因的表达；转染干扰质粒至 NF．KB分子的表达或磷酸化，ELISA结果显示细胞上清中DcR3表达量下降， 本室制备的FasL，通过流式细胞术发现ERK表达降低可以改变FasL活性。 关键词：ERKl／2基因；DcR3；RNA干扰；FasL． ABsTRACT ABSTRACT isthemost Gastriccarcinoma common gastrointestinalmalignancy．The ERKJMAPKtransductionhas asacritical ofcell signal pathway regulator emerged abnormalactivationresultsin proliferation，differentiation，andapoptosis．Its and of differentiation deprivationapoptosis