益生菌对E.coli+O78在雏鸡消化道黏附影响.pdfVIP

摘要 摘 要 本研究选择两株鸡源益生菌进行体外益生特性检测及其对禽致病大肠杆菌O78 在雏鸡消 化道内黏附的影响。 实验利用不同pH 值、胆盐浓度的MRS 培养基上益生菌的存活率检测其耐酸、耐胆盐的 能力；用革兰氏染色方法检测益生菌在鸡胚肠黏膜上皮细胞上的黏附能力；利用间接免疫荧 光方法体外检测益生菌对禽致病性大肠杆菌在肠黏膜上皮细胞上的黏附抑制能力。根据上述 试验结果进行雏鸡体内试验研究。 药敏试验方法筛选出对雏鸡肠道菌群敏感的抗生素——头孢哌酮，建立抗生素诱导菌群 失调模型，检测益生菌对禽致病大肠杆菌O78 在雏鸡消化道黏附的影响，150 只无O78 感染 的1 日龄雏鸡随机分为6 组，各组处理如下： 1 组：连续3d 灌服头孢哌酮40mg/kg/d ，清除肠道菌，第4d 口服接种浓度为2×109cfu/ml 禽致病性大肠杆菌O78 0.5ml 。 9 2 组：连续3d 灌服头孢哌酮40mg/kg/d ，清除肠道菌，第4d 口服接种浓度为2×10 cfu/ml 禽致病性大肠杆菌O78 同时接种等浓度嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌混合液各0.5ml 。 3 组：连续3d 灌服灭菌等渗生理盐水0.5ml，第4d 口服接种浓度为2×109cfu/ml 禽致病 性大肠杆菌O78 0.5ml 。 4 组：连续3d 灌服灭菌等渗生理盐水0.5ml，第4d 口服接种浓度为2×109cfu/ml 禽致病 性大肠杆菌O78 同时接种等浓度嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌混合液各0.5ml 。 5 组：抗生素处理对照组，只连续3d 灌服头孢哌酮40mg/kg/d 。 6 组：空白对照组，只连续3d 灌服灭菌等渗生理盐水。 利用EMB 选择性培养，革兰氏染色，生化鉴定及间接免疫荧光染色等方法对雏鸡嗉囔、 腺胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠七个消化道黏膜上黏附的O78 进行分离鉴定，利 用统计学分析检测益生菌在雏鸡消化道内对禽致病性大肠杆菌的影响。 益生菌的益生特性试验结果表明，两株益生菌对不同pH 值及胆盐浓度均具有较强的耐 受性，二者之间略有差异，其中嗜酸乳杆菌的对pH 值和胆盐的耐受力高于干酪乳杆菌；在 鸡胚肠黏膜上皮细胞的黏附试验中，两株菌均可粘附在上皮细胞上，干酪乳杆菌在细胞上黏 附的菌体数量略高于嗜酸乳杆菌；间接免疫荧光染色方法检测益生菌抑制O78 黏附情况的结 果显示，禽致病性大肠杆菌黏附于上皮细胞的菌数与对照组比较照组明显减少，而且两种益 生菌混合后对O78 的抑制效果最为明显，打孔法检测益生菌的抑菌特性与上述结果一致。 雏鸡体内的研究结果显示，益生菌可明显抑制禽致病性大肠杆菌O78 在消化道内的黏附 定植（P0.05），抗生素处理组和未处理组两雏鸡模型O78 黏附的抑制效果比较发现，未处 理组雏鸡消化道定植的O78 菌数明显低于抗生素处理组，推测外源益生菌对病原菌的生长繁 殖具有抑制作用，同时还可促进体内优势菌群生长，提高消化道定植抗力，阻止病原微生物 的定植黏附。 关键词 益生菌；禽致病性大肠杆菌；体外益生特性；体内作用效果 i Abstract The Effect of Adhesion with Probiotic on E.coli O78 Indigestive Teact of Chicken Abstract The study was finished by two kind of probiotics selected from chicken, its aim is to detected the effect of adhesion in E.coli O78 in the digestive of chick