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脂肪酶产生菌的筛选鉴定及相关研究 脂肪酶产生菌的筛选鉴定及相关研究 姓名：玄国营(生物化学与分子生物学) 指导教师：高剑峰教授 摘 要 胜以橄榄油为唯一碳源，筛选出具有转酯活性橄榄油的菌株，并对其进行鉴定。l、 通过聚合酶链式反应手段扩增得菌株体内相应橄榄油基因；2、通过冷丙酮法提 取粗酶进行制取生物柴油的实验。 越橄榄油作为唯一的碳源来进行富集、用具有显色作用的指示剂来作为变色指示 剂来进行选取适合的菌株，用摇瓶含有特定培养基的复筛的方法获得较高产脂 肪酶的野生的菌株一株。并且利用两种方法，其一是平板扩散法其二是酸碱滴 定法以及转酯的相关反应的综合型的技术实验方法，筛选出具有较高转酯活性 的脂肪酶的野生菌株一株来；利用相关的实验室方法及冷丙酮法得到相应的野 生菌株体内脂肪酶基因相对应的脂肪酶，实验室的相关条件包括叔丁醇作为相 应溶剂，并且催化实验室甲醇与自行购买的棉籽油反应制取生物柴油；设计特 定的引物来扩增菌株体内脂肪酶基因，有利于下一步继续试验。利用聚合酶链 式反应扩增的手段来得到两个完整的脂肪酶的基因，制备感受态并且将目的基 因转化进工程菌，经由菌落聚合酶链式反应来检测，最后将对筛选到的A2菌株 即克雷伯氏菌属(K]ebsiella 个脂肪酶基因，这两个基因都属于克雷伯氏菌的MGH78578区段上的CDS。将 结墨皇缝迨； 1．采集不同地方的土样，进行了脂肪酶产生菌大量的筛选工作。经以橄榄油为唯一的 活，最终筛选出一株脂肪酶产生菌A2。菌株A2体内产生的脂肪酶可以催化转酯反 应。通过对A2进行形态学观察，生理生化测定初步确定A2为克雷伯氏菌属 (Klebsiella sp．)。 2．对筛选到的A2菌株即克雷伯氏菌属(Klebsiella rDNA sp．)通过PCR扩增进行16S 特征片段比较分析，证实A2菌株与克雷伯氏菌属(Klebsiella sp．)相似性达到99％， 将测序结果序列在GenBank上注册，接受号是FJ615552。 酶，进行酶活测定，胞外酶脂肪酶活性高于胞内脂肪酶活性。随后以叔丁醇作溶剂， 脂肪酶产生黼的筛选鉴定及椭熬研究 催钝棉籽油与争醇反应铡褥了生物柴漓。 《。霹舞选裂熊A2菌株帮觉雷馋氏蓠属(Klebsiella 脂肪酶基因，这两个基因都属于克臀伯氏菌的MGH78578区段上的CDS。将测序 结果序列豢GenBank上注麓，接受罨分剽是FJ615癸3霹FJ615554。 初的9．02U／mL提高到12．33U／】[1lL。 蓉毽鎏：宝耨柴漕；竟誊德茨菌；籍黪酶；疆赫辫基霾 脂肪酶产生菌的筛选鉴定及相关研究 strainof andrelated Lipaseproducingscreening，identification research andMolecular Postgraduate：XuanGuo—ying(BiochemistryBiology) Supervisor：Pro．GaoJian—feng Abstract stlai他．Ontheone