利用苹果酸钠提高次黄嘌呤核苷产率的方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 *CN102154414A* (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 102154414 A (43)申请公布 日 2011.08.17 (21)申请号 201110063885.6 (22)申请 日 2011.03.17 (71)申请人 许昌瑞达生物科技有限公司 地址 461000 河南省许昌市经济技术开发区 阳光大道西段16 号 (72)发明人 蔡传康 王健 闫汝东 (74)专利代理机构 郑州红元帅专利代理事务所 (普通合伙) 41117 代理人 秦舜生 (51) Int.C l. C12P 19/40 (2006.01) C12R 1/125 (2006.01) 权利要求书 1 页 说明书 5 页 (54) 发明名称 利用苹果酸钠提高次黄嘌呤核苷产率的方法 (57) 摘要 本发明公开了一种利用苹果酸钠提高次黄嘌 呤核苷产率的方法，它由摇瓶液体菌种培养、肌苷 发酵液制取两大工艺过程组成。选用了遗传稳定 的保藏菌种GDIR-1005，根据调整细胞代谢流分 配的原理，在发酵过程中采用添加苹果酸钠和流 加葡萄糖液、苹果酸钠的新工艺，有效提高肌苷发 酵过程产率，克服了发酵培养基C ∶N 比例失调、 菌种产苷不高、发酵周期长、转化率低等不足。菌 种同步生产率和产苷水平高，发酵产苷水平高，肌 苷产率可达58g/L 以上，转化率43％以上，达到现 有工艺的最高水平。 A 4 1 4 4 5 1 2 0 1 N C CN 102154414 A 权 利 要 求 书 CN 102154415 A 1/1 页 1. 利用苹果酸钠提高次黄嘌呤核苷产率的方法，其特征是在于如下所述 ： (1) 摇瓶液体菌种培养 ①选用枯草芽孢菌Bacillus subtilis GDIR-1005 为保藏菌种， ②将葡萄糖、磷酸氢二钾、硫酸镁、苹果酸钠、酵母粉、琼脂、水按重量百分比配制成初 级菌种培养基并装入茄瓶， ③在初级菌种培养基中接入步骤 (1) ①所述的保藏菌种，静置培养后获得初级菌种， ④将上述初级菌种接入摇瓶培养基中，并在往复式摇床上培养，获得摇瓶液体菌种 ； (2) 高产率次黄嘌呤核苷发酵液制取 ①将葡萄糖、磷酸氢二钾、硫酸镁、苹果酸钠、酵母粉、水按重量百分比配制成二级菌种 培养基，蒸汽灭菌后泵入二级种子罐，降温后再接入步骤 (1) ④所述的摇瓶液体菌种，并将 经压缩、过滤的无菌空气输入二级种子罐，培养后获得二级菌种 ； ②将葡萄糖、磷酸氢二钾、硫酸镁、苹果酸钠、酵母粉、水按重量百分比配制成发酵培养 基，蒸汽灭菌后泵入发酵罐，降温后再接入步骤 (2) ①所述的二级菌种，并将经蒸汽灭菌、 降温后的葡萄糖与苹果酸钠液，在无菌、空气保压的情况下进行连续流加培养，即可获得高 产率次黄嘌呤核苷发酵液。 2. 根据权利要求1 所述的利用苹果酸钠提高发酵生产肌苷产率的方法，其特征是 初级菌种培养基的原料重量百分比为葡萄糖 ∶磷酸氢二钾 ∶硫酸镁 ∶苹果酸钠 ∶酵母 粉 ∶琼脂 ∶水＝1％±0.5％∶0.2％±0.2％∶0.1％±0.1％∶0.2％±0.2％∶2％ ±2％∶2％±2％∶94.5％±5％。 3. 根据权利要求1 所述的利用苹果酸钠提高发酵生产肌苷产率的方法，其特征是摇瓶 菌种培养基的原料重量百分比为葡萄糖 ∶磷酸氢二钾 ∶硫酸镁 ∶苹果酸钠 ∶酵母粉 ∶水 ＝3％±0.5％∶0.2％±0.2％∶0.1％±0.1％∶0.2％±0.2％∶1.5％±1.5％∶95％ ±2.5％。 4. 根