金黄色葡萄菌肠毒素B的可溶性表达及单链抗体库的构建.pdfVIP

Y 6t0074 金黄色葡萄球菌肠毒素B的可溶性表达 及单链抗体库的构建 张崇旭 摘要 有停止，金葡菌肠毒索B可以引起食物中毒，中毒发病较急，导致动物和人呕吐， 研究表明，引起恒河猴子呕吐作用是感觉刺激经过迷走神经及交感神经至呕吐中 枢。肠毒素B还可引起人和动物腹泻，人们认为肠毒素诱发腹泻至少可归因于抑制 了肠腔中水分的吸收或增加了经粘膜流入肠液中的水分或是二者共同作用的结 果。肠毒素B可引起伪膜性小肠炎，大肠炎而使病人死亡。一般是继腹泻之后出 现休克循环衰竭，尸检可见到伴有肺泡血管的显著充血，出血性肺水肿和肝白细胞 强大刺激能力的细菌外毒素，其无需抗原提呈细胞(antigen cellsAPCI presenting 内处理加工，能直接与APC膜上的MHC．11类分于抗原结合槽外侧非限制性结合， 以完整的蛋白质分子形式被提呈给T细胞，只需极低浓度(1～10n∥m1)即可诱发 cell betachain 最大的应答效应，导致带有特异性T细胞受体t3链可变区(T receptor variable regions，TCRVB)序列的T细胞大量活化增殖并释放出大量多种细胞因子， 产生生物学效应，鉴于SAg具有特殊的生物学效应，有关SAg在抗肿瘤方面的 研究日益引起了人们的注意，随着对治疗恶性肿瘤药物研究的进展，肠毒素B逐渐 成为人们注意的焦点。肠毒素B作为超抗原，激活T淋巴细胞，致使其释放细胞因 子，从而达到杀伤肿瘤细胞的目的。不同细胞周期的T细胞对作为超抗原的肠毒索 B的反应不同。SEB是目前研究的最多的一种超抗原，最早获得的葡萄糖球菌肠毒 素超抗原是从金葡菌的发酵液中提取的。首先进行产毒培养，然后进行分离纯化， 但天然毒素的产量低(20．200mg／L)，给后续的毒素纯化带来极大困难，本研究将 在大肠杆菌BL2l(DE3)@获得了良好的表达，并对表达的重组蛋白进行了纯化和 免疫原性鉴定，纯化产量达150mg／l，可用于中试。目前对SEB中毒治疗主要是～ 些传统疗法，包括输液，换气以及肾透析等。国外一些研究者以SEs(SEA，SEB， 功，但未见进一步报道。单链抗体分子量小，免疫原性低半衰期短，在血液循环 中清除快，可以作为SEB食物中毒的特效药以及快速检测。噬菌体表面呈现技术 (Phagedisplay 并呈现于噬菌体表面，构成表型与基因型直接相连的随机多肽、蛋白、抗体库。这 种外源多肽、蛋白、抗体可以识别相应的结合分子而被筛选出来。由于其技术上 的优越性；易于扩增和选择；筛选得到的氨基酸序列可以通过DNA测序确定。因而 得到广泛应用和迅速发展。本研究用本研究主要通过PCR，克隆SEB基因到表达 中，建立抗体库，本研究通过改构的噬菌粒成功的构建了单链抗体库，为筛库和 SEB中毒检测，治疗等奠定了基础。结果获得了良好的可溶性表达，纯化产量为 库容达10“，可用于下一步工作。 关键词金黄色葡萄球菌肠毒素B可溶性表达单链抗体噬菌体展示 II Solube ofSEBandconstruct express aSEBrabbit Fv single—chainlibrary ZbangChongxu Abstract：Theof enterotoxinB(SEB)haveneverbeen studystaphylococcal sinceitwasdiscoveredin isacommoncau