垂直电泳系统工作原理.pdfVIP

教 案 课程名称 分子生物学实验 授课题目（章、节） 实验二 授课教师 陈永燕 迟彦 授课对象 生物工程031 授课时间 8学时 教学方法 实际操作（分组实验） 选用教具 授课内容提要及时间分配：（8学时） 实验二 DNA的检测 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 紫外风光光度计检测DNA的浓度和纯度 [实验目的] 通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术 [实验原理] DNA分子在琼脂糖凝胶中时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电 点的溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。在一定的电场强度下, DNA分子的 迁移速度取决于分子筛效应.具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不一 样,可进行分离.凝胶电泳不仅可分离不同分子质量的 DNA, 也可以分离相对分 子质量相同,但构型不同的DNA分子。 [实验步骤] 1．制备1％的琼脂糖凝胶溶液； 2．封闭有机玻璃内槽，放好梳子，倒胶； 3．用移液器将混和了上样缓冲液的DNA样品加入点样孔； 4．接通电源电泳； 5．观察实验结果 [注意事项] 1. 溴化乙锭是强烈致癌剂，在操作过程中注意戴手套； 2. 处理稀EB溶液的方法： 1）每100ml溶液中加入100mg粉状活性炭； 2）于室温放置1小时，不时搅动； 3）用Whatman 1号滤纸过滤溶液，滤液可从下水道丢弃； 4）用塑料袋封装滤纸和活性炭，作为有害废物予以丢弃。 大 连 大 学 教学重点、难点及基本要求： 掌握琼脂糖凝胶电泳的分离DNA的原理；制胶流程；制胶注意事项。 作业与思考题： 1. 琼脂糖凝胶电泳实验原理? 2. 影响电泳迁移的主要因素? 3. 凝胶上样缓冲液（loading buffer）的作用? 4. DNA染料EB（ethidium bromide）的作用? 5. 琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺分离DNA分子大小范围? 6. DNA纯制品，OD260/OD280=？ RNA纯制品，OD260/OD280=？什么情况下 DNA样品比值偏高或偏低。 单元教学小结（经验效果、问题、改进措施、信息反馈等） 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 一：讲解相关知识： 1电泳（electrophoresis)： 带电荷的物质，在电场中的趋向运动称为电泳。 2琼脂糖(agarose)： 线性多糖聚合物，从红色海藻产物琼脂中提取出来的。当琼脂糖溶液加热到 沸点后冷却凝固形成良好的电泳介质。 琼脂糖凝胶可形成三维筛孔的通道。 3凝胶浓度决定孔径大小 凝胶浓度越大，形成的孔径越小，则分辨率越大 凝胶浓度越小，形成的孔径越大，则分辨率越小 4实验原理： DNA琼脂糖凝胶电泳是分离，鉴定、纯化DNA的分子生物学最常用的技术。 DNA分子在高于等电点