毛细管电色谱法在生物大分子中的应用.pdfVIP

毛细管电色谱法在生物大分子中的应用 1 1 2 1 辛晓婷 ，王荣 ，刘勇 1 兰州大学生命科学学院，兰州 （730000 ） 2 兰州军区兰州总医院药材科，兰州 （730050 ） E-mail ：rhea1001@163.com 摘 要：毛细管电色谱法作为一种新的高效分离技术，近几年发展迅速。本文对毛细管电色 谱技术、毛细管电色谱柱技术及毛细管电色谱技术在生物大分子的应用等方面逐步进行了综 述。毛细管电色谱法的优越性势必使它成为分离生物大分子的一个新方向。 关键词：毛细管电色谱法，毛细管电色谱柱，生物大分子 中图分类号：Q503 1．引言 随着生命科学的迅速发展，检测与生命相关的生物大分子（包括核酸、蛋白质、多肽、 酶以及多糖）为人类征服疑难杂症，特别是对肿瘤的预警、诊断和治疗有着重要的意义。生 物大分子的检测基于组成复杂、成分微量或痕量的体系中，要深入探索和了解生命领域中疾 病的发病机理，需要分辨率强、检测灵敏度高和分析速度快的分析方法，许多常规的分析技 术已不能胜任。以毛细管电泳、色谱学为主要内容的现代分离分析技术极大推动了复杂体系 中生物大分子的检测方法学研究。其中以毛细管电色谱法﹙capillary electrochromatography， CEC ﹚具有灵敏度高、分离度高和分离速度快的特点为代表的分析方法，已成功地应用于无 机物小分子等领域[1] 。近年来，CEC 技术也被应用于分子生物学领域检测生物大分子，为了 更好地将 CEC 技术用于分子生物学领域，建立良好地分离生物大分子的 CEC 方法，本文主 要对毛细管电色谱技术、柱技术及其在生物大分子中的应用进行以下综述。 2 ．毛细管电色谱技术原理 毛细管电色谱(CEC)是在毛细管中填充或在毛细管壁涂布、键合色谱固定相，用电渗 流或电渗流结合压力流来推动流动相的一种液相色谱法，是高效液相色谱法和高效毛细管电 泳的有机结合[2] 。由于它在毛细管中填充或在毛细管内壁涂布、键合或交联了色谱固定相， 因此CEC具有高效液相色谱(HPLC)和毛细管电泳(CE)的双重优势。它一方面解决了CE选择 性差、难以分离中性物质的问题, 另一方面大大提高了液相色谱的分离效率[3] 。CEC主要依 靠电渗流驱动流动相,所以它具有CE塞式流的优点,从而具有与CE相似的高效性，物质在CEC 中的分离是基于样品分子在固定相与流动相两相之间作用力的差异和样品分子间电泳淌度 的差异[4] 。因此，CEC技术具备了高灵敏度，高分辨率和高速的特点。 Knox[5]进行了有关填充柱电色谱法理论研究工作，弄清了填充柱电色谱法中的峰展宽 及热效应，并指出了制约毛细管电色谱法发展及应用的瓶颈问题。Tsuda[6]研究了电色谱法 中的色谱行为，设计了连续进样电色谱法，对样品进行了富集。1991年Knox[7]弥补了早期电 色谱法中的缺陷，从理论上讨论了填料大小、电解质溶液浓度与电渗流速度及柱效间的关系。 [8] 至此，有关电色谱法的理论基础已全部建立。1992年，Yamamoto等 发现电渗流为0.8～ 2.6mm/s时，塔板高度无明显的变化，这为快速分离创造了条件。近年来，随着电色谱基本 理论的进一步完善，电色谱在生化药物的分析、制药工业、手性药物拆分等领域得到广泛应 1 本课题得到国家自然基金面上项目（No）的资助。 - 1 - [9] 用 ，特别是CEC技术在分离检测核酸、蛋白质和小肽等生物大分子方面有广泛地应用前景。 3 ．毛细管电色谱柱技术 为了得到较好的分离度，并减少毛细管柱对大分子化合物的吸附，必须对CEC 中的毛 细管柱进行修饰。柱子是CEC 的“心脏”，柱技术是CEC 的关键[10