牡蛎抗氧化活性肽的酶解工艺研究.pdfVIP

第24卷第2期 大 连 水 产 学 院 学 报 VoI．24No．2 2009年 4月 JOURNALOFDAHANFISHERIESUNIVERSITY Apr．2009 文章编号：1000—9957(2009)02-0095-05 牡蛎抗氧化活性肽的酶解工艺研究 汪秋宽 ，宋琳琳 ，徐玲2，刘红丹 ，何云海 ，任丹丹2，虞星炬 (1．中国科学院大连物理化学研究所，辽宁 大连 116023；2．大连水产学院辽宁省水产品加工及综合利用 重点开放实验室，辽宁 大连 116023) 摘要：以木瓜蛋白酶和中性蛋白酶为工具酶，利用正交试验法确定了木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解制备牡 蛎抗氧化活性肽的最佳酶解工艺。结果表明：当时间为 150min、酶用量为6％、温度为45℃、pH为7．0 时，木瓜蛋白酶酶解液的抗氧化活性最强；当时间为 110min、酶用量为3％、温度为65℃、pH为6．0时， 中性蛋白酶酶解液的抗氧化活性最强。用SephadexG一15葡聚糖凝胶柱层析分析的结果表明，木瓜蛋白酶 酶解液中最佳抗氧化活性组分的相对分子质量为 1191和826左右，中性蛋白酶酶解液最佳抗氧化活性组 分的相对分子质量为 1074和735左右，其抗氧化活性峰值与蛋白肽在280nlrli下的吸收峰值分别相吻合。 关键词：牡蛎；酶解工艺；抗氧化活性肽 中图分类号：TS201．2 文献标志码：A I~anderson等…提出，人体 内生物大分子的降 1 材料与方法 解可能导致 自由羟基、自由氧基的积累，在体内细 胞、肌肉组织内自由基反应持续地发生与积累是导 1．1 材料 致各种疾病的主要原因。自由氧基特别是 自由羟基 和超氧化物 自由基被认为与微血管和实质细胞的受 试验用新鲜牡蛎购于大连市黑石礁市场。木瓜 损紧密相关-2J。自由基清除剂作为抗氧化物能不 蛋白酶和中性蛋白酶 (A．S．1398)分别购于上海生 同程度地清除人体 内积累的自由基。动物实验研究 物制剂厂和无锡天星酶制剂厂，SephadexG一15为 表明，有些抗氧化剂包括超氧化物歧化酶 (SOD， Pharmacia公司进 口分装，蓝色葡聚糖2000为上海 超氧化 自由基的清除剂)、二 甲基亚砜 (DMSO， 伯奥生物科技有限公司出品，牛血清白蛋 白购于上 自由羟基清除剂)，还有几种合成的抗氧化剂对这 海浦江生物化学研究所，细胞色素C为Sigma公司 些疾病均具有治疗和预防作用 J。但因使用人工 出品，L一酪氨酸为中国医药 (集团)上海化学试 合成抗氧化剂对人体有一定的副作用，因而受到严 剂公司出品，阿斯巴甜为 Ajinomoto公司出品，杆 格控制。因此，对纯天然抗氧化剂的研究与制备引 菌肽为Sigma公司出品。其他试剂均为分析纯。 起了很多科学家的关注H一 。牡蛎是一种营养价值 1．2 方法 丰富的海洋贝类，含有丰富的蛋 白质、脂肪、维生 素和微量元素 ，近些年来，关于牡蛎提取液具 1．2．1 牡蛎中基本成分的检测 采用直接干燥法 有抗氧化作用的研究较多 ’m ¨。本试验中，作 测定水分[】纠；用氯仿 一甲醇法测定脂肪含量 ¨； 者 以牡蛎酶解液清除 自由羟基的活性作为酶解 目标 用微量凯氏定氮法测定牡蛎浆液粗蛋 白含量 ¨； 产物的指标，分析了酶解液组分的相对分子质量分 用硫酸苯酚法测定总糖含量 ¨引。 布及其抗氧化活性，旨在确定木瓜蛋 白酶和中性蛋