以TLR7激动剂为佐剂免疫治疗粉尘螨过敏性哮喘模型研究.pdfVIP

摘要 摘 要 过敏性哮喘是一种以气道炎症为特征的慢性疾病，主要由抗原特异性Th2 型细胞产生的细胞因子分泌失调引起。研究表明刺激Toll样受体7(TLR7)不 仅能够触发抗病毒反应，还能够减轻试验性的过敏性哮喘。在本研究中，我们 f 将一种新化学合成的多功能TLR7激动剂(TLR7a)结合到粉尘螨抗原重组Der 1蛋白上，用来免疫治疗粉尘螨过敏性哮喘小鼠，研究此新型疫苗的免疫调节效 果和分子机制。 f 方法：首先构建TLR7a．Der1疫苗。根据蛋白质在280nm处的紫外吸收峰 f 测定TLR7a．Der1的偶联度。SDS．PAGE和圆二色谱分析蛋白结构是否发生改 f 变。分别用Western．blot和ELISA检测TLR7a—Der1的免疫原性和免疫抗原性。 然后用粉尘螨粗蛋白致敏小鼠建立过敏性哮喘模型。免疫治疗后，立即评估小 集肺泡灌洗液和脾细胞培养上清检测Thl／Th2型细胞因子的表达(IL一4、IL．10、 IFN．丫和IL．12)，观察肺组织的病理学变化。 f f 结果：TLR7a—Der1疫苗构建成功。TLR7a与Der1蛋白的共价结合摩尔 f 比率为5：1，偶联后TLR7a．Der1的一级结构和二级结构并没有改变，TLR7a．Der f f1 1疫苗的免疫原性和免疫抗原性依然存在，可以用于下一步的免疫治疗。Der f 和TLR7a．Der1疫苗治疗后的小鼠在激发后，气道高反应性、肺部炎症和BALF f f 中嗜酸性粒细胞炎症都有所减轻。此外，Der1和TLR7a．Der1治疗组血清特 f f1 1和TLR7a．Der 异性IgE反应降低，特异性IgG2a和IgGl反应升高。Der 都有抑制过敏性哮喘的效果，但TLR7a．Derf f 1的疗效要更好。TLR7a．Der1治 疗组脾细胞培养上清和BALF中IL．4水平显著降低，IFN吖和IL．12水平升高， f f f 而TLR7a．Der1并不能像Der1一样介导IL．10分泌。TLR7a+Der1对过敏 f 性哮喘也有一定的治疗作用，但效果没有将TLR7a和Der 1偶联显著。用氯喹 阻断TLR7后，抗炎作用明显降低。单独使用TLR7a和氯喹小鼠并不能改变过 敏性哮喘的进程。 f 结论：结果证明TLR7a—Der1疫苗对小鼠哮喘模型具有一定的免疫保护作 用，其机制可能是直接介导Th2反应转变成Yhl反应，该疫苗有望成为治疗变 摘要 态反应性疾病的一种新途径。 关键词：过敏性哮喘；粉尘螨；免疫治疗；TLR7激动剂 Abstract A