芽孢杆菌α淀粉酶基因的克隆表达和酶学性质分析.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 ’() *! 1( *# 年 月 $%% $ !#$ %’()(*(+$ ,-$ +,-,./,0 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 芽孢杆菌 淀粉酶基因的克隆、表达和酶学性质分析 ! ! ， ， $ $ 8 彭 平 吴 襟 程安春 高启禹 张树政 （中国科学院微生物研究所 北京 %%%:% ） $ 8 （四川农业大学 雅安 #$%!8 ） （甘肃农业大学 兰州 J8%%J% ） 摘 要：在仔猪结肠内容物中分离出一株能利用淀粉的芽孢杆菌!#$%%’ KG * 73%#，构建了全基因组+1L 文库，从 中筛选出 淀粉酶基因 ，分析测定了其核苷酸序列并进行了表达；其中 编码的蛋白有 个氨基酸、分 6 ()* ()* $# ! 子量为: I#M+；它与已报道的!#$%%’ (+,-+.$( 的 淀粉酶序列有E8N 的同源性。经过氨基酸序列比较分析还发 6 ! 现， 含有淀粉酶家族中 个高度保守的酶催化活性区。经多步纯化，重组酶的比活共提高了 倍，获得凝 L.CO ! $$ I$ 胶电泳均一的蛋白样品；经 检测， 酶分子量为 。该酶的最适反应温度为 ，酶的最适 3+36PLQ; L.CO JM+ R S #%R 反应 为 ，在温度不超过 时，酶活较稳定； 能迅速降解淀粉生成麦芽寡糖，属于内切糖苷酶。 GT J I% R L.CO 关键词：芽孢杆菌，淀粉酶，基因克隆和表达，酶学性质 6 ! 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） UJ: L %%%6#$%E $%% %#6%:J#6% 淀粉是高等植物体内碳水化合物的主要储藏形 淀粉酶的基因序列进行同源性比较分析，通过酶学 ［］ 式，广泛存在于谷物、豆类的种子和果实中 。淀粉 性质研究，深入探讨了该 淀粉酶对淀粉的水解机