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小飞守角制作 虾肌肉蛋白的提取 小飞守角制作 主要内容 凡纳滨对虾肌肉蛋白的提取方案 1 讨论 2 凡纳滨对虾肌肉蛋白的提取方案 对虾前处理 取对虾肌肉组织500mg 剪碎、液氮研磨至粉末状 添加裂解液 离心 凡纳滨对虾弃头剥壳、去肠、去血，用蒸馏水洗净沥干水分，于-18℃贮藏备用 500μL，4℃孵育1-2h 分装于离心管中（50mg/管） 13000 r/min低温（4℃）离心2h抽提，即为蛋白样品，于-18℃保存备用 定量检测蛋白质浓度 考马斯亮蓝法 分组 讨论 从对虾内部选取肌肉组织。 对虾全身覆盖着一层几丁质壳，去壳时不能保证完全去除这层薄膜，而且肌肉中必定存在着肉眼无法辨别的结缔组织。 肌肉组织的选取 -18℃保存。 对虾在-20℃、-30℃、-40℃蛋白变性差异不显著（陶欢，2010）。 对虾保存 讨论 液氮研磨 低温 蛋白结构 讨论 浓度8mol /L尿素、浓度2 mol /L 硫脲、浓度2% CHAPS、浓度10μl /mL PMSF、 浓度18 mmol /L DTT、浓度0 .5% IPG缓冲液。 8 M尿素9.6g，4% CHAPS 0.8g，40 mM Tris 0.0484g，用前每1mL裂解液中添加5μL Carrier Ampholyte（载体两性电解质）, 200 mM TBP（三正丁基磷） 10μL。 裂解液Ⅰ 裂解液Ⅱ 讨论 灵敏度 时间 特点 双缩脲法 1~20mg 8~10h 干扰相对少，灵敏度低 紫外吸收法 50~100μg 5~10min 快速，灵敏度低，干扰多 Lowry法 20~250μg 40~60min 干扰多、费时、操作严格、灵敏度高 Bradford法 1~5μg 5~15min 灵敏、快速、简便、干扰少、稳定 * * 小飞守角制作 * *
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