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第40卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第9期 2012年9月 of 1336—1340 ChineseJournal AnalyticalChemistry 蛋白一脂质体复合物毛细管电泳筛选单胺氧化酶抑制剂 李冰1，2 吕雪飞1 庆宏1 邓玉林¨ (北京理工大学生命学院，北京100081)2(邢台学院生物化学系，邢台054001) 摘要基于酶与底物间的相互作用，建立了蛋白一脂质体复合物毛细管电泳筛选单胺氧化酶(MAO)抑制剂 的新方法。分别将不同浓度的4种Ⅳ一炔丙基胺类化合物添加至含有蛋白一脂质体复合物的毛细管电泳缓冲 液中，抑制MAO活性。考察MAO底物犬尿胺(Kyn)在含有不同浓度N一炔丙基胺类化合物缓冲液中的迁移 HPA的增加呈现出明显增加的趋势。化合物N，^卜二炔丙基一R一2_己胺和N，N_二炔丙基一R一2-辛胺对MAO活 ‘ 性抑制不明显，Kyn的RMTR随这两种浓度增加变化不大。此结果与柱外孵育测定化合物活性结果一致。与 传统MAO筛选剂筛选方法相比，本方法快速，成本低，酶消耗量少且不受分离电压等干扰因素的影响。 关键词脂质体；毛细管电泳；单胺氧化酶；抑制剂；相互作用 1 引 言 单胺氧化酶(Monoamineoxidase，MAO)是帕金森病药物治疗的重要靶点之一【l】。许多研究表明， MAO抑制剂能够有效降低脑内多巴胺代谢，减缓PD症状，同时具有神经保护作用嘲。因此MAO抑制 剂的筛选已受到广泛关注。传统的MAO抑制剂筛选方法主要包括高效液相色谱法(HPLc)，放射化学 法和荧光检测法等旷51。HPLC和放射化学法成本高，较为耗时。荧光检测法灵敏度高，但容易受溶液 中非目标分子的干扰。毛细管电泳具有分辨率高，分析速度快，高通量，低消耗等优点，已被广泛用于分 子间相互作用研究∽1和抑制剂筛选工作【蝴。 脂质体作为理想天然的生物膜模型，被广泛用于毛细管电泳的假固定相来分离蛋白、手性分子以及 模拟药物一生物膜相互作用00~121。本研究将蛋白与脂质体重组形成蛋白一脂质体复合物模拟膜蛋白 成本低，同时采用双内标体系，能够准确反映分子间相互作用的大小，干扰因素少。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 era,总长48．5era,375 删o℃E毛细管电泳仪(Agilent公司)；石英毛细管(有效长度40 pm(o．d．)，50pm 22R高速离心 机(德国Heraeus公司)。 2．2实验方法 2．2．1脂质体制备大豆卵磷脂与胆固醇以质量比3：l混合溶解于正己烷中，将溶液置于圆底烧瓶 中，于50℃水浴进行旋转蒸发，待正己烷完全挥发，瓶底形成一层淡黄色薄膜即停止。向其中加人适量 201卜10-07收稿；2012-01—23接受 (No．2009BAK59801)资助项，目 ’E-mail：deng@bit．edu．cn 万方数据 第9期 李冰等：蛋白一脂质体复合物毛细管电泳筛选单胺氧化酶抑制剂 cH3 3 2)4——cH—N：…’…，， CH一--(CH。一‰‰到 CH， 3 2)3 一N：，、．T‘ r、一，、。． 3 2)5一cH—jNr、ITP—r1“ CH，(CH：卜曼二裟三茎：