魔芋多糖固定化肌红蛋白的直接电化学与电催化.pdfVIP

维普资讯 第34卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究报告 第 12期 2006年 l2月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry l683一l687 魔芋多糖固定化肌红蛋白的直接电化学与电催化 荣联清 ， 张志凌 林 毅 谢娅妮 庞代文 (武汉大学化学与分子科学学院，武汉 430072) (萍乡高等专科学校化工系，萍乡337055) 摘 要 用魔芋多糖 (KGM)和N，Ⅳ_二甲基甲酰胺 (DMF)的加合物，将肌红蛋 白(Mb)固定在玻碳 电极 (GCE)上，制备了稳定的Mb．KGM．DMF／GCE修饰电极，并研究了Mb在修饰 电极上的直接电化学行为和电 催化性能。该电极在 pH=7．0的磷酸盐缓冲溶液(PBS)中，一0．38V( )处有一对氧化还原峰，峰电位差 AE =70mV，该峰正是 Mb中血红素辅基 Fe ／Fe“电对的氧化还原特征峰。在0．2—9．0V／s扫速的范围内， 氧化还原峰峰电流大小和扫描速率成正比，呈现出表面控制行为。在pH为5．0—12．0的范围内，式电位和 pH值呈线性关系，表明电子传递过程伴随着质子转移。同时，Mb—KGM—DMF／GCE修饰电极表现出良好的电 催化性能，对氧、H2O2有显著的催化作用。在4．70～75．0~mol／L的范围内，其催化峰电流大小与H2O2的浓 度有良好的线性关系，其线性回归方程 i=0．127+0．093C，r=0．9989，表观米氏常数为80．8p,mol／L。 关键词 肌红蛋 白，魔芋多糖 ，修饰电极，直接电化学，电催化 1 引 言 生物体的呼吸作用、光合作用和涉及氧化还原反应的新陈代谢过程，都与蛋白质分子之间的电子传 递有关，研究蛋白质的直接电化学和电催化，对于认识生命体内的电子转移机制和酶的催化机理、以及 重要生命物质在生命体内的代谢过程有着重要意义¨。肌红蛋白(Mb)是含血红素铁卟啉的蛋白质，在 生物体内起储氧和促进氧在细胞中扩散的作用，并有调节血液 、骨骼肌中一氧化氮和重金属离子浓度的 功能 。由于Mb和血红蛋白的三维结构已经确定，并具有过氧化氢酶和细胞色素 P450的催化特 征 J，因此常被用作研究蛋白和酶结构与功能关系的模型，成为广泛关注的热点E4-61。 血红素蛋白质具有较高的重组能，在裸电极上氧化或还原的过电位较大，电子传递速度较慢，而且 其氧化还原过程伴随着水分子与 Fe(Ⅲ)的结合和离解，通常表现为电化学．化学(EC)过程 。，也制约 了电子传递的速度。另外，蛋白质溶液中的一些大分子杂质和变性的蛋 白质容易吸附在 电极表面，形成 绝缘膜，阻碍血红素与电极的电子传递进程 J。近期研究表明，利用表面活性剂 m‘J、溶胶．凝胶膜 ¨、 离子聚合物 ¨、纳米材料 H等通过包埋、交联、组装等形式将血红素蛋白质固定在电极表面，可以实 现血红素蛋白质与电极的直接电子传递。用聚多糖水凝胶膜将氧化还原蛋白质固定在电极表面，便于 人们从电子传递过程的角度，探讨蛋白质与多糖膜的相互作用。刘慧宏等 曾用海藻酸钠 (SA)将血 红蛋 白(Hb)同定在热裂解石墨电极表面，研究了Hb在 sA膜中的电化学行为。 本研究用魔芋多糖 (KGM)和Ⅳ，Ⅳ．二甲基甲酰胺 (DMF)的加合物将 Mb固定在GCE上，制备了稳 定的Mb．KGM—DMF／GCE修饰电极，实现了Mb和玻碳电极之间的直接电子传递，并研究了Mb在修饰 电极上的直接电化学行为和电催化性能。采用紫外一可见，表面反射红外光谱和原子力显微镜对修饰电 极进行了表征。发现Mb与KGM和DMF的加合物之间存在较强的作用，并且Mb在KGM和DMF的加 合物中可以保持其原始构象。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 CHI660A电化学工作站(上海辰华仪器公司)。NEXUS870FT-IR红外光谱仪 (NicoletInstrument Corporation，USA)。TU-1901紫外-可见光谱仪 (北京普析通用仪器有限责任公司)。PicoScan原子力显 2~6-05．30收稿 ；2006-08-07接受 本文系国家自然科学基金资助项 目(No